[发明专利]与控制黄瓜果刺有无基因Tril共分离的显性分子标记

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域的分子标记，特别涉及一个与控制黄瓜果刺有无基因Tril共分离的显性分子标记。

背景技术

黄瓜(Cucumis sativus L.)是葫芦科(Cucurbitaceae)黄瓜属(Cucumis)一年蔓生的草本植物，黄瓜作为世界十大重要的蔬菜作物之一，也是我国主栽蔬菜作物之一。果实是黄瓜经济性状最重要的部分，黄瓜果实属于瓠果，由子房和花托共同发育而成。果刺是表皮毛在果实上的形态高度特化，也是重要的果实性状。果刺的有无性状是由Trichome-less(Tril)基因调控，有果刺的野生性状(Tril)为显性，无果刺的突变体性状(tril)为隐性。关于黄瓜果刺的研究报道，最早可追述到1997年，华北类型黄瓜地方品种“大青把”自交后代的微毛自然突变体被发现，其表现为茎、叶、萼片、果实表面均覆盖肉眼难察觉的微毛，并被命名为“glabrous(gl)”。通过遗传分析发现，该微毛基因为隐性突变，基因被进一步克隆和分子验证。随后发现欧洲温室黄瓜类型的自然突变体，该突变体表现为茎、枝、叶、卷须、花瓣、萼片及子房表面均无表皮毛，果实无刺无瘤，被命名为“Trichome-less(Tril)”。通过遗传分析发现，该突变同样为隐性突变，并将其等位显性基因命名为Tril。无果刺tril突变成株和微毛gl突变体成株均表现为表皮无可见毛无可见果刺，用肉眼难以区分，前人也没有对Tril候选基因进行进一步的定位和分析。

图位克隆(Map-based cloning)，可在基因产物未知的情况下，利用分离群体的遗传连锁分析或染色体的异常，将目的基因定位到染色体的一个具体位置，找到与其紧密连锁的分子标记，不断缩小候选区域进而克隆基因。最常用的标记筛选方法是分离体分组混合分析法(Bulked segregant analysis，BSA)，该方法在一对具有目的基因表型差异的亲本所构建的分离群体中，根据目的基因的表型，分别选取相同数量的个体，构成两个亚群，将每个亚群中个体的DNA等量混合，形成两个相对性状的“基因池”(Gene pool)，然后用合适的分子标记对两个基因池进行分析，在两池间表现出多态性的分子标记与目的基因座位相连锁，再利用分离群体进一步检测所得分子标记与目的基因的连锁程度，从而确定其在已知分子图谱或染色体上的位置。由于构建基因池使用了特定的分离群体，且在分组时仅对目的基因表型进行选择，这样保证了其他性状的遗传背景基本相同，两个基因池之间理论上应主要在目的基因区段存在差异，排除了环境及人为因素的影响，使研究结果更为准确可靠。和目的基因有紧密连锁的分子标记具有高效、快速、不受环境条件限制等优点，可在苗期进行选择，加快育种的进程。

随着人们生活水平的提高，黄瓜品质育种已提上日程。黄瓜果刺性状属于果实感观品质范畴。欧美温室类型的黄瓜为无果刺的果皮，称其为水果黄瓜，其市场价格为普通黄瓜的2-3倍。外观光滑黄瓜污染少，清洗方便，食用卫生，是无公害蔬菜的理想品种。经检测表明：无刺黄瓜果肉农药残留量比有刺黄瓜低27％，果皮农药残留量低18％。黄瓜果刺基因Tril控制果刺的发育和形成，它的研究将会推动黄瓜品质育种进程。用与目的性状共分离连锁的分子标记进行标记辅助选择在黄瓜遗传育种中是十分有效的方法。稳定遗传的无刺突变体为黄瓜果刺形成机理研究提供了理想的材料，其和有刺亲本的F₁群体表现为少刺，为黄瓜培育少刺新品种提供了稳定无刺亲本。

发明内容

本发明的目的，在于提供一个与控制黄瓜果刺有无基因Tril共分离的显性分子标记。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一个与控制黄瓜果刺有无基因Tril共分离的显性分子标记，命名为CoT-01，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述CoT-01与有果刺基因Tril连锁，无果刺基因tril不能扩增出特异性片段。

所述CoT-01由SEQ ID NO.2所示的上游引物和SEQ ID NO.3所示的下游引物扩增得到，扩增程序为：94℃5分钟；94℃30秒，60℃30秒，72℃30秒，35个循环；72℃5分钟。

引物由上海生工科技有限公司合成。