[发明专利]猪蓝耳病毒抗体检测卡及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测卡，特别是涉及一种用于快速定量检测猪血清中猪蓝耳病毒抗体的检测卡及其制备方法。

背景技术

猪蓝耳病又称猪繁殖与呼吸综合征（Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome，PRRS）自二十世纪八十年代末期开始流行，1992年国际兽医局正式命名，主要感染猪，尤其是母猪，该病严重影响其生殖功能，临床主要特征为流产，产死胎、木乃伊胎、弱胎，呼吸困难，在发病过程中会出现短暂性的两耳皮肤紫绀，故又称为蓝耳病。猪蓝耳病是由猪蓝耳病毒收起以妊娠母猪繁殖及各种年龄猪，特别是仔猪的呼吸道疾病为特征的一种严重的传染性疫病，并已遍布全世界主要养猪国家和地区，成为威胁养猪业健康发展的主要疫病之一。

疫苗为控制疫病的重要手段之一，日常监测疫苗产生抗体就被人们给予了更高的期望。对于养殖场来说，猪群的日常监测是选择疫苗、评估免疫程序合理性、掌握猪群健康状态的重要手段，同时也可从侧面反映猪场管理是否合理，也是适时注射疫苗的主要依据。

市面上有猪蓝耳病毒抗体胶体金快速检测卡，通过对样品的检测，即可粗略判断猪体内是猪蓝耳抗体含量，兽医根据检测结果判断是否需要注射猪蓝耳疫苗。

同样市场上也大量使用检测猪蓝耳抗体酶标试剂盒，即ELISA酶标试剂盒，ELISA试剂盒需要酶标仪、温育反应条件、洗板条件，操作工作环境和专业技术人员，另外检测样本还需要复杂的前处理，如采集血液，分离血清等；而快速胶体金虽然检测方便，不需专业技术人员和工作环境，但其检测的灵敏度低，且只能定性，检测范围窄。而本发明专利的目的就是克服以上两类试剂盒的各自缺点，通过简单的操作，现场快速、准确、高灵敏地定量（半定量）分析，实现在养猪现场检测。

发明内容

本发明的目的就是提供一种猪蓝耳病毒抗体检测卡及其制备方法，能完全解决上述现有技术的不足之处。

本发明的目的通过下述技术方案来实现：

一种猪蓝耳病毒抗体检测卡，包括装配在外壳内的检测卡本体，所述检测卡本体包括底板，在底板上依次设置样品垫、标记垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述硝酸纤维素膜上包被猪蓝耳抗原为检测线，包被羊抗鸡抗体为质控线，在外壳上对应样品垫开设加样孔，对应硝酸纤维素膜上的检测线和质控线开设视窗孔。

作为优选，所述底板为PVC底板,在PVC底板上从左至右依次粘贴样品垫、标记垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，且样品垫的右端搭在标记垫的左端上，标记垫的右端搭在硝酸纤维素膜的左端上，吸水纸左端搭在硝酸纤维素膜的右端上。

作为优选，所述标记垫由载体基层和标记物组成，标记物为载体基层上喷涂镧系荧光检测微球和镧系荧光质控微球形成的一层膜，且检测微球为标记有猪蓝耳抗原的微球，质控微球为标记有鸡lgY或兔lgG的质控微球。

作为优选，所述硝酸纤维素膜上的检测线和标记垫上采用的猪蓝耳抗原均为灭活猪蓝耳病毒抗原、猪蓝耳疫苗或猪蓝耳重组结构蛋白M蛋白、N蛋白和GP5；所述硝酸纤维素膜上质控线采用的羊抗鸡抗体为羊抗鸡lgY的lgG或者羊抗兔lgG。

作为优选，所述检测微球和质控微球均为表面带有羟基或氨基的硅胶微球或聚苯乙烯微球。

作为优选，所述标记在生物原料上的镧系荧光微球的镧系荧光是指镧系元素Eu、Sm或Tb与β－二酮配基产生的荧光。其发光效率高、吸收光谱宽、发射光谱很窄、斯特克斯位移宽，使其荧光光谱分析的灵敏度很高。

作为优选，所述样品垫为检测血清或血浆的样品垫，或者为检测全血的样品垫。

作为优选，本检测卡利用猪血样品中猪蓝耳病毒抗体、猪蓝耳病毒抗原的标记物和硝酸纤维素膜上包被猪蓝耳病毒抗原通过双抗原夹心法来检测猪血样本中猪蓝耳病毒抗体。

作为优选，本检测卡为定量层析检测卡，它是通过检测仪检测层析后检测卡的检测线和质控线发出的荧光信号，然后根据此批检测卡的IC卡储存的标准曲线，再由检测线和质控线的荧光信号从标准曲线计算出待检物的浓度。

一种猪蓝耳病毒抗体检测卡的制备方法，其特征在，包括以下步骤：

步骤一，把硝酸纤维素膜粘贴在PVC底板上，并在硝酸纤维素膜上喷涂已稀释至0.2～0.5mg/ml的羊抗鸡lgY的lgG形成质控线和已稀释至0.3～1.0mg/ml的猪蓝耳抗原形成检测线，烘制后备用；

步骤二，用封闭液封闭硝酸纤维素膜10～30分钟，用10mM磷酸缓冲液清洗硝酸纤维素膜10～30分钟，干燥后备用；