[发明专利]一种水蛭多肽的分离纯化方法

权利要求书

1.一种水蛭多肽的分离纯化方法，其特征是：首先将水蛭提取物加入模仿人体肠细胞吸收的系统中培养，然后将被吸收的物质进行层析分离即可；

其中，水蛭提取物的提取方法如下：

取水蛭干燥全体粉碎成20-150目粉末，加入6-16倍重量的水，或者水蛭鲜活全体，加入1-6倍重量的水，匀浆；取匀浆液，调节pH至7-9，按每1g水蛭干药材加入2000-20000U酶的比例加入胰蛋白酶，控制温度40-60℃，酶解2-12小时，冷却至室温；酶解完后，向上述酶解液中加入1-5倍体积的丙酮或者乙醇冷藏沉淀4-12小时，过滤，滤液减压干燥，得水蛭提取物；

所述模仿人体肠细胞吸收的系统为具有或长满人结直肠腺癌Caco-2细胞的transwell小室；

所述层析分离首先经阴离子交换柱层析，浓度为0.5-2mol/L的NaCl溶液线性洗脱，收集各个峰的活性成分，经血管平滑肌细胞迁移筛选，取活性最高的一个峰的活性成分，浓缩并干燥，然后将浓缩并干燥后的活性成分，用蒸馏水溶解，再经过凝胶过滤层析，所述凝胶过滤层析柱的填料为Sephadex LH-20，蒸馏水洗脱，收集各个峰的活性成分，经血管平滑肌细胞迁移筛选，取活性最高的一个峰的活性成分，收集此处的活性组分，即可。

2.如权利要求1所述的分离纯化方法，其特征是：所述培养条件为在37℃，5％二氧化碳，饱和湿度条件下培养0.5-10h。

3.如权利要求1所述的分离纯化方法，其特征是：所述水蛭提取物加入模仿人体肠细胞吸收的系统前，使用pH值7.2的PBS配置成浓度为0.5-5mg/ml的溶液。