[发明专利]一种鸭IgG单克隆抗体及应用

说明书

技术领域

本发明涉及鸭血清的检测与鉴定技术领域，具体涉及一种鸭IgG单克隆抗体及应用。

背景技术

自2010年春季以来，在我国华东地区产蛋鸭群中爆发了以产蛋下降为特征的鸭的流行 病，并且该病在短时间里迅速传播至河南、河北、江苏地区、随后又传至安徽、福建、广东 沿海等主要鸭养殖地区，该病传播迅猛，主要导致种鸭、产蛋鸭采食量和产蛋率直线下降、 感染程度较重的甚至绝产及死亡，不同地区不同品种的蛋鸭都有发病，只是各个鸭群的发病 率高低不一，同一鸭群的发病率几乎是百分之百，病死率不等(李玉峰等，2011；滕巧泱等， 2010)。

万春和等人2010年在某个产蛋急剧下降种鸭场中通过采集病鸭的卵巢，无菌分离到病 毒，经过对病毒提取，克隆测序后，序列分析显示，分离到的病毒有600750bp序列与黄病毒 科黄病毒属坦布苏病毒(TMUV)同源性最高。随后，苏敬良等人在河北省白洋淀地区的发 病鸭群中也分离到了相似的病毒，并暂且命名为BYD病毒。对分离到的病毒做遗传进化分 析显示该病源与1955年在马来西亚地区伊蚊体内分离到的坦布苏病毒(Tembusuvirus)亲缘 关系最近，同源性也很高(Yanetal.，2011)。因此在2011年的水禽大会上根据黄病毒的 命名规则最终确定该病毒是黄病毒属的新成员，将该病名称统一为“鸭坦布苏病毒病”，将该 病毒命名为鸭坦布苏病毒(DuckTembusuvirus，DTMUV)。

目前用于该病的诊断方法主要是进行鸭坦布苏病毒的分离和鉴定，至少需要5天时间。 针对该病毒的PCR和等温环介导方法方法灵敏高，但前者需要特殊仪器设备，且两种方法 都容易因污染核酸而出现假阳性。常规的抗体检测方法诊断鸭坦布苏病毒的灵敏度低，非特 异性高。因此，建立灵敏度高、特异性好的抗体检测方法将对该病的快速诊断具有重要意义， 而由高亲合力单克隆抗体制备的酶标二抗是建立抗体检测方法的前提。因此，申请者以纯化 的鸭血清IgG为抗原，获得了分泌抗鸭血清IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞，并利用所分泌 的单克隆抗体，研发了一种鸭坦布苏病毒ELISA抗体检测试剂盒，该方法将为鸭坦布苏病 毒的诊断提供灵敏、特异、且适合批量检测的检测手段。

发明内容

本发明的目的是在于提供了一种鸭IgG单克隆抗体，该单克隆抗体特异性高，而且能 够大量生产，该单抗能够特异性识别鸭血清IgG的表面蛋白，特异性好，灵敏度高，为建 立鸭血清IgG相关检测试剂盒提供基础。

本发明还有一个目的是在于提供了一种分泌抗鸭IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞，申请人 于2016年1月14日将该杂交瘤细胞送至中国典型培养物保藏中心保藏，地址：中国武汉武 汉大学，保藏编号：CCTCCNO：C201608，分类命名：杂交瘤细胞株4C7。

本发明的再一个目的是在于提供了一种鸭IgG单克隆抗体在制备鸭血清抗体检测试剂 中的应用，以该单抗作为一抗或酶标二抗应用于鸭血清IgG的检测，检测量大、敏感性高、 特异性好、结果易于分析判断。

本发明的最后一个目的是在于提供了一种鸭坦布苏病毒间接ELISA试剂盒，该试剂盒 使用方便，临床使用中不需要特殊的仪器设备，大大节约了疾病监测成本。

为了实现上述的目的，本发明采用以下技术措施：

一种分泌鸭IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞：

用纯化的鸭血清IgG为抗原免疫小鼠，用获得的免疫鼠脾淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融 合，获得杂交瘤细胞；进一步用鸭血清IgG为抗原筛选，获得能稳定分泌高亲合力抗鸭IgG 单克隆抗体的杂交瘤细胞。

申请人于2016年1月14日将该杂交瘤细胞送至中国典型培养物保藏中心保藏，地址：中 国武汉武汉大学，保藏编号：CCTCCNO：C201608，分类命名：杂交瘤细胞株4C7。

该杂交瘤细胞株4C7可以在含有20％胎牛血清的1640培养基中以半贴壁方式生长，生长 环境为37℃，5％CO₂的培养箱。该杂交瘤细胞株为浑圆透亮，成簇生长，并能稳定的分泌 鸭血清IgG的单克隆抗体。

一种鸭IgG单克隆抗体在检测鸭血清抗体中的应用，包括以本发明提供的鸭IgG单克隆 抗体作为检测抗体制备成的鸭血清抗体检测试剂盒，或是利用本发明提供的鸭IgG单克隆抗 体检测鸭血清抗体。