[发明专利]化合物H2在制备脂肽类抑菌制剂中的应用

说明书

技术领域

本发明属于化合物领域，具体涉及化合物H2在制备脂肽类抑菌制剂中的应用。

背景技术

芽孢杆菌是一类产生芽孢的革兰氏阳性菌株，它的分布广泛，生理特征丰富，易于分离和培养，是自然界中重要的微生物菌群，芽孢杆菌可以产生多种抗菌活性物质，包括由非核糖体途径合成的非核糖体肽类抗生素以及由核糖体途径合成的细菌素、酶类及其他活性蛋白类抗菌物质等。

168菌株是芽孢杆菌的模式菌株，也是目前研究的最为透彻的菌株，他的全基因组已于1997年测序完成。与野生芽孢杆菌不同的是模式菌株168由于在实验室的长期继代培养，发生了很多的自发突变因而丧失了很多野生型的特点，比如sfp基因的自发突变，使得168菌株丧失了产生脂肽类化合物的能力，因而缺失了抑菌的能力。sfp基因编码的4’-磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶，是芽孢杆菌非核糖体途径合成脂肽类化合物的关键基因。

本研究的目标菌株解淀粉芽孢杆菌HAB-2(2015年1月27日在中国典型培养物保藏中心进行了菌种保藏，并证明存活，其保藏登记号为：CCTCC M 2015070，地址为武汉大学内)经过一系列的前期实验表明：生防菌HAB-2具有广谱的抑制热带病原真菌的活性，并且对部分植物具有促进生长，对鲜果具有保鲜的作用，但是该菌株没有sfp基因，但是通过现代的仪器分析手段我们又在HAB-2发酵液中检测得到了由于sfp缺失而不可能得到的脂肽类物质——表面活性素类物质，因此研究该菌株的具体活性成分很有必要，值得进一步的研究。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术中的不足，对解淀粉芽孢杆菌HAB-2的发酵液的具体活性成分进行研究，提供化合物H2在制备脂肽类抑菌制剂中的应用。

本发明提供了化合物H2在制备脂肽类抑菌制剂中的应用，化合物H2的结构式如下式所示：

优选地，化合物H2应用于制备防治植物真菌病害制剂。

进一步优选地，所述植物真菌病害为番茄早疫病、西瓜枯萎病、香蕉枯萎病、棉花枯萎病、橡胶炭疽病、橡胶树棒孢霉落叶病、茶轮斑病、芒果炭疽病、和/或橡胶褐根病中的一种或多种。

优选地，化合物H2从解淀粉芽孢杆菌HAB-2的发酵液中分离得到，所述菌株HAB-2的保藏编号为：CCTCC M 2015070。

优选地，化合物H2的制备方法如下：

步骤1，取解淀粉芽孢杆菌HAB-2的发酵液，正丁醇萃取，取萃取液，浓缩；

步骤2，对浓缩物采用柱层析分离得到化合物H2。

进一步优选地，柱层析分离包括以下步骤：

(1)对浓缩物使用减压柱层析(抽柱Vacuum Liquid Chromatography)，采用氯仿和甲醇进行梯度洗脱；

(2)取具有抑菌活性的馏分，采用常压柱分离，洗脱所用溶剂为步骤(1)中洗脱出具有抑菌活性的馏分的溶剂；

(3)取步骤(2)得到的馏分中具有抑菌活性的馏分，采用凝胶柱分离，洗脱所用溶剂为步骤(1)中洗脱出具有抑菌活性的馏分的溶剂；

(4)取步骤(3)得到的馏分中具有抑菌活性的馏分，采用凝胶柱分离洗脱所用溶剂为甲醇；

(5)取取步骤(4)得到的馏分中具有抑菌活性的馏分，过C18反向柱，采用甲醇和水梯度洗脱，合并具有抑菌活性的部分，浓缩干燥，即得。

更进一步优选地，若步骤(1)得到的具有抑菌活性的馏分由不同比例的氯仿和甲醇的混合溶剂洗脱出来的，则步骤(2)洗脱所用溶剂的极性小于或等于步骤(3)洗脱所用溶液的极性。

优选地，所述解淀粉芽孢杆菌HAB-2的发酵液的采用下述步骤制备而成；将解淀粉芽孢杆菌HAB-2接种于液体的溶菌肉汤培养基中，在26～30℃的条件下，50～500转/分钟摇菌1～3天，即得到发酵液。

本发明对解淀粉芽孢杆菌HAB-2的发酵液的具体活性成分进行研究，分离得到化合物H2，具有广谱的抑制热带病原真菌的活性，并且对部分植物具有促进生长，对鲜果具有保鲜的作用，可应用于制备脂肽类抑菌制剂，防治植物真菌病害，尤其可应用于番茄早疫病、西瓜枯萎病、香蕉枯萎病、棉花枯萎病、橡胶炭疽病、橡胶树棒孢霉落叶病、茶轮斑病、芒果炭疽病、和/或橡胶褐根病等，值得应用推广。

附图说明

图1为化合物H2的¹H-¹H COSY、HMBC和NOSEY的关联图；