[发明专利]一种同时检测蔬菜中多种抗生素残留的方法

说明书

本发明涉及一种抗生素检测方法，该方法具体包括(1)对蔬菜样品进行预处理，得到抗生素提取液；(2)将抗生素提取液萃取得到抗生素洗脱液；(3)将抗生素洗脱液用旋转蒸发仪蒸干，用初始流动相定容后过针头滤器过滤获得抗生素待测液；(4)将抗生素待测液通过优化的高效液相色谱串联质谱法进行待测抗生素的检测。本发明提供了一种用于检测蔬菜样品中11种抗生素残留的方法，回收率高，检测限低，克服了现有抗生素检测方法成本高、检测抗生素种类少和检测限高的缺点与不足，为今后的抗生素环境行为和风险评估奠定了基础。

技术领域

本发明涉及一种抗生素检测方法，尤其涉及一种利用高效液相色谱串联质谱同时检测蔬菜中多种抗生素残留的方法。

背景技术

抗生素是指由细菌、放线菌、真菌等微生物经培养而获得的或是用化学合成法合成的结构相同或类似的具有杀灭或抑制病原微生物的物质。近年来大量的抗生素作为兽药和饲料添加剂广泛应用于畜禽养殖业中，在动物疾病防治、提高饲料转化效率、促进动物生长发育方面发挥着重要作用。但是，通过口服或肌肉注射进入动物体内的抗生素并不能被完全吸收利用.其中以原形或初级代谢产物的形式随尿或粪便排出体外的量约占用药量的40％-90％。人用抗生素在污水厂进出水中含量均较高，致使流域水体受到抗生素污染。因此，抗生素大量且源源不断地进入环境，造成环境种抗生素残留以及耐药细菌的传播扩散，严重影响整个农业生态系统的安全。尤其是抗生素进入到蔬菜中，被人类食用后会直接危害人类健康。

建立同时检测环境介质中多种抗生素的分析方法是研究其环境行为和生态环境风险的基础。而蔬菜残留的抗生素属于痕量物质，现有方法多采用高效液相色谱仪技术进行研究，技术检出限相对较高。并且目前的方法所能检测的抗生素种类单一，对于多种抗生素的测定费用较高。因此建立一种能够有效测定蔬菜样品中多种抗生素残留量的方法很有必要。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测蔬菜样品中抗生素残留的方法，即通过有效提取蔬菜中的抗生素，在优化的液相色谱和质谱条件下利用高效液相色谱串联质谱法对蔬菜样品中多种抗生素进行检测，以克服现有抗生素检测方法成本高、检测抗生素种类少和检测限高的的缺点与不足。

本发明的技术方案：(1)对蔬菜样品进行预处理，得到抗生素提取液；(2)将抗生素提取液萃取得到抗生素洗脱液；(3)将抗生素洗脱液用旋转蒸发仪蒸干，用1ml初始流动相定容后过针头滤器过滤获得抗生素待测液；(4)将抗生素待测液通过优化的高效液相色谱串联质谱法进行待测抗生素的检测；

在上述技术方案中，优选地，对蔬菜样品进行预处理方法为将采集回的蔬菜样品干燥后，称取1g样品用提取剂提取得抗生素提取液。

优选地，所述干燥方式为冷冻干燥。

优选地，所述的抗生素提取液的获得方法为将1g样品与10ml提取剂混合后在涡旋仪上震荡30s，用超声波清洗仪超声15min，在转速为8000rpm的条件下离心15min，倒出并保留上清液；再将沉淀与10ml提取剂混合后在涡旋仪上震荡30s，用超声波清洗仪超声15min，在转速为8000rpm的条件下离心15min，将两次上清液合并得到抗生素提取液。

优选地，所述的提取剂为乙腈和盐酸的混合溶液，乙腈∶盐酸为125∶4(v/v)。

在上述技术方案中，优选地，抗生素洗脱液的获得方法为将抗生素提取液通过0.45μm的尼龙滤膜，将过膜后提取液使用旋转蒸发仪浓缩至3-5ml。将浓缩后的提取液通过活化后的HLB柱进行富集，用超纯水淋洗HLB柱去除部分杂质，并抽干5min，再用洗脱剂洗脱HLB柱获得抗生素洗脱液。

优选地，所述的HLB柱容积为6ml。

优选地，所述的HLB柱活化方法为先用5ml甲醇自然过柱，再用10ml去离子水分两次自然过柱。

优选地，所述的提取液通过HLB柱时流速为1ml/min。