[发明专利]一种同时检测蔬菜中多种抗生素残留的方法

权利要求书

1.一种同时检测蔬菜中多种抗生素残留的方法，其特征在于通过对蔬菜样品中11种抗生素的有效提取和纯化，在液相色谱和质谱条件下利用高效液相色谱串联质谱法同时对其中多种抗生素含量进行检测；具体步骤如下：

(1)将采集回的蔬菜样品冷冻干燥后，磨碎后过2mm筛；称取1g过筛样品与10ml的乙腈和盐酸混合溶液提取剂混合，在涡旋仪上震荡30s后超声15min，在转速为8000rpm的条件下离心15min，倒出并保留上清液；再将沉淀与10ml提取剂混合后再涡旋仪上震荡30s后超声15min，在转速为8000rpm的条件下离心15min，将两次上清液合并得到抗生素提取液；

(2)将抗生素提取液通过0.45μm的尼龙滤膜，将过膜后提取液使用旋转蒸发仪浓缩至3-5ml，浓缩后的提取液通过活化后的HLB柱进行富集，用超纯水淋洗HLB柱去除部分杂质，并抽干5min，再用洗脱剂洗脱HLB柱得到抗生素洗脱液，所述的洗脱剂是乙腈和盐酸的混合液，二者的体积比例为99∶1；

(3)将抗生素洗脱液用旋转蒸发仪蒸干，用初始流动相定容至1ml，再用孔径为0.22μm的尼龙针头滤器过滤后得到待测液；

(4)利用高效液相色谱串联质谱法对待测液中11种抗生素的含量进行检测；

①色谱条件：色谱柱：150mm×4.6mm，3.5μm；流动相A为0.1％甲酸溶液，流动相B为乙腈；流速为0.3ml/min；进样体积5μl；柱温35℃；梯度洗脱顺序：0～11min，80％A；11～16min，80％～40％A；16～18min，40％～80％A；18～28min，80％A；

②质谱条件：离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正/负离子扫描；检测方式：多反应监测(MRM)；干燥气温度和流速：300℃，10.0L/min；雾化气压力：20.0psi；毛细管电压：3800V；

表1. 11种目标抗生素的质谱参数

所述11种抗生素包括土霉素、金霉素、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺噻唑、磺胺间甲氧嘧啶、环丙沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、泰乐菌素、氯霉素。

2.根据权利要求1所述的一种同时检测蔬菜中多种抗生素残留的方法，其特征在于乙腈和盐酸混合溶液提取剂中乙腈和盐酸的比例为125∶4。

3.根据权利要求1所述的一种同时检测蔬菜中多种抗生素残留的方法，其特征在于所述的HLB柱容积为6ml。

4.根据权利要求1所述的一种同时检测蔬菜中多种抗生素残留的方法，其特征在于所述的HLB柱的活化方法是：先用5ml甲醇自然通过新的HLB柱，再用10ml去离子水分两次自然过柱。

5.根据权利要求1所述的一种同时检测蔬菜中多种抗生素残留的方法，其特征在于浓缩后的提取液通过活化后的HLB柱的流速为1ml/min。

6.根据权利要求1所述的一种同时检测蔬菜中多种抗生素残留的方法，其特征在于所述的洗脱剂洗脱HLB柱时的速度为1ml/min。

7.根据权利要求1所述的一种同时检测蔬菜中多种抗生素残留的方法，其特征在于所述初始流动相为0.1％甲酸溶液和乙腈的混合液，二者的体积比例为8∶2。