[发明专利]一种中成药“益肾补骨液”HPLC特征图谱的构建方法

说明书

技术领域

本发明属于中药技术领域，具体涉及中成药的HPLC特征图谱的构建方法。

背景技术

益肾补骨液(骨碎补、何首乌、茯苓、续断、白芍、当归、党参、熟地黄、黄精等十二味药材组成)标准收载于部颁标准中药成方制剂第十册，标准编号：(WS₃-B-2020-95)，公开了益肾补骨液的质量控制方法。本品质量标准中仅有性状、检查、鉴别项，没有含量测定项，用于产品生产中的质量控制还难于精准。

发明内容

本发明的目的是提供一种中成药“益肾补骨液”HPLC特征图谱的构建方法

用于“益肾补骨液”生产中的质量控制，克服现有的质量控制方法存在的上述不足。

本发明的HPLC特征图谱的构建方法包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取本品5～15ml蒸至近干，加水25～35ml使溶解,加乙醚25～35ml振摇提取，弃去乙醚液，水液用乙酸乙酯振摇提取3次，每次25～35ml,合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇溶解定容至5ml量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

(2)对照品溶液的制备：取柚皮苷照品适量，精密称定，分别加甲醇制成每1ml约含0.1mg的溶液，即得。

(3)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～15μl，注入高效液相色谱仪，记录120分钟内的色谱图，图谱数据导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统.》2004A版分析，即得“益肾补骨液”的特征图谱。

前述方法中，所述高效液相色谱测定的色谱条件为：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.02％磷酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱；流速0.8～1.2ml·min-1，柱温30～40℃，检测波长225～235nm；理论塔板数按柚皮苷峰计算应不低于3000。

优选的，所述的一种“益肾补骨液”的HPLC特征图谱的构建方法，包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取本品10ml蒸至近干，加水30ml使溶解,加乙醚30ml振摇提取，弃去乙醚液，水液用乙酸乙酯振摇提取3次，每次30ml,合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇溶解定容至5ml量瓶中，摇匀，过0.22μm的微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液。

(2)对照品溶液的制备：取柚皮苷照品适量，精密称定，分别加甲醇制成每1ml约含0.1mg的溶液，即得。

(3)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～15μl，注入高效液相色谱仪，记录120分钟内的色谱图，图谱数据导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统.》2004A版分析，即得“益肾补骨液”的特征图谱。

所述高效液相色谱测定的色谱条件优选为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.02％磷酸水溶液为流动相B，梯度洗脱，流速1.0ml·min-1，柱温35℃，检测波长230nm，理论塔板数按柚皮苷峰计算应不低于3000。

梯度洗脱过程中，流动相A、B的比例变化为：0～10min，A相5％，B相95％；10～30min，A相14％-17％，B相80％-83％；30～65min，A相17％-20％，B相83％-80％；即梯度洗脱程序表1：

如前述一种“益肾补骨液”的HPLC特征图谱的构建方法得到的特征图谱，所述图谱中有7个特征峰。对7个特征峰进行归属：1号特征峰归属为白芍药材、2号特征峰归属为何首乌药材、3号和5号(柚皮苷)特征峰归属为骨碎补药材、4号和7号特征峰归属为续断药材、6号特征峰归属为陈皮药材。

有益效果：

1.本发明建立了“益肾补骨液”HPLC特征图谱共有模式，标定了7个共有峰，建立的特征图谱技术含量高，避免了益肾补骨制剂质量控制的单一性和片面性，减少了人为处理产品质量达标的可能性。

2.本发明选择在230nm波长处进行测定，其出峰较多，反映的信息较完全；各个峰吸收值良好，基线平稳，也避免了近紫外杂质峰较大吸收情况。

3.本发明方法所得一种“益肾补骨液”的HPLC特征图谱的构建方法图谱的峰多，峰形好，易于鉴别，相似性高，专属性强，稳定性好，准确可靠。

附图说明

图1是本发明测得的益肾补骨液高效液相特征图谱；

图2是11批益肾补骨液特征图谱叠加图；

图3是益肾补骨液特征图谱共有峰归属图；

具体实施方式

实施例1

一种益肾补骨液的HPLC特征图谱的构建方法，包括以下步骤：