[发明专利]一种中成药“益肾补骨液”HPLC特征图谱的构建方法

权利要求书

1.一种中成药“益肾补骨液”HPLC特征图谱的构建方法，包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取本品5～15ml蒸至近干，加水25～35ml使溶解,加乙醚25～35ml振摇提取，弃去乙醚液，水液用乙酸乙酯振摇提取3次，每次25～35ml,合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇溶解定容至5ml量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；

(2)对照品溶液的制备：取柚皮苷照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml约含0.1mg的溶液，即得；

(3)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～15μl，注入高效液相色谱仪，记录120分钟内的色谱图，图谱数据导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2004A版分析，即得“益肾补骨液”的特征图谱；

步骤(3)中，所述高效液相色谱测定的色谱条件为：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.02％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱，流动相A、B的比例变化为：0～10min，A相5％-14％，B相95％-86％；10～20min，A相14％-16％，B相86％-84％；20～30min，A相16％-17％，B相84％-83％；30～55min，A相17％-18％，B相83％-82％；55～65min，A相18％-20％，B相82％-80％；流速0.8～1.2ml·min^-1，柱温30～40℃，检测波长225～235nm；理论塔板数按柚皮苷峰计算应不低于3000。

2.根据权利要求1所述的中成药“益肾补骨液”HPLC特征图谱的构建方法，包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取本品10ml蒸至近干，加水30ml使溶解,加乙醚30ml振摇提取，弃去乙醚液，水液用乙酸乙酯振摇提取3次，每次30ml,合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇溶解定容至5ml量瓶中，摇匀，过0.22μm的微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液；

(2)对照品溶液的制备：取柚皮苷照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml约含0.1mg的溶液，即得；

(3)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～15μl，注入高效液相色谱仪，记录120分钟内的色谱图，图谱数据导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2004A版分析，即得“益肾补骨液”的特征图谱；

步骤(3)高效液相色谱测定的色谱条件优选为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.02％磷酸水溶液为流动相B，梯度洗脱，流速1.0ml·min^-1，柱温35℃，检测波长230nm，理论塔板数按柚皮苷峰计算应不低于3000；

步骤(3)中，梯度洗脱过程中，流动相A、B的比例变化为：0～10min，A相5％-14％，B相95％-86％；10～20min，A相14％-16％，B相86％-84％；20～30min，A相16％-17％，B相84％-83％；30～55min，A相17％-18％，B相83％-82％；55～65min，A相18％-20％，B相82％-80％。