[发明专利]一种牡丹组织培养容器苗技术

说明书

技术领域

本发明属植物组织培养领域，涉及一种牡丹的组织培养繁殖方法。具体而言，本发明涉及一种从健壮生长的牡丹母株上采集无病虫害的健康饱满鳞芽作为外植体，以环境友好的表面消毒方法建立无菌培养体系；在一种WPL增值培养基上扩繁试管苗(不定芽)；在组织培养瓶里的营养钵生根基质中诱导试管苗生根形成组织培养容器苗，经环境适应性驯化(过渡和炼苗)过程，组织培养容器苗从适应植物组织培养室(简称“组培室”，下同)条件驯化成适应田间自然条件的容器苗。本发明克服了牡丹外植体表面消毒困难，组织培养材料容易褐化死亡，生根小植株移栽炼苗过程大量死亡，植株需在秋季移栽成活的季节限制，组织培养容器苗植株根系得到完整保护，随时随地换盆、移栽或出圃而不影响植株生存生长，成为牡丹优质种苗繁育生产的关键技术。

背景技术

牡丹属于芍药科(原毛莨科)芍药属牡丹组(Sect.Moutan DC.)植物，原产我国，是我国传统名花。一种牡丹，杨山牡丹变种‘凤丹’，学名为Paeonia ostii T.Hong et J.X.Zhang var.lishizhenii B.A.Shen(Paeonia ostii‘Lishizhenii’)，抗逆性强，适应性广，从东北哈尔滨到西北甘肃、新疆；从南部福建到北部内蒙都有引种栽培。

牡丹的应用主要有3个方面，观赏和繁殖砧木(嫁接繁殖牡丹重瓣花观赏品种)；中药材(丹皮)栽培；牡丹籽油新资源食品(中华人民共和国卫生部公告2011年第9号)。其中，该牡丹籽油是在21世纪初发现，并迅速得到我国领导人和政府高度重视(习近平：“今天长了见识”，(http：//news.xinhuanet.com/politics/2013-11/27/c_118308353.htm)。我国食用油对外依赖度超过60％，牡丹籽油的发现和应用无疑有利于缓解我国食油窘境。国家林业局和国家农业综合开发办公室已将油用牡丹列为农业综合开发的名优经济林等示范项目，建设靓丽生态环境和发展林下特色经济(国家林业局计财司国家农业综合开发办公室关于印发《2016年农业综合开发林业项目申报指南》的通知，规山函【2015】242号)。

牡丹用于群体绿化美丽中国和油料生产亟需大量优质种苗。目前生产上繁殖牡丹种苗的方法主要有播种、嫁接、分株和吊包等方法，播种繁殖的实生苗存在两个严重问题，繁殖后代群体变异大，苗木质量难以保证；田间播种繁殖的植株大多数带有根结线虫病，容易导致病疫传播，严重制约产业发展和国内外交流。牡丹无性繁殖方式主要有嫁接、分株、吊包等，这些繁殖方式受到母株品质和繁殖材料数量和质量限制，主要用于观赏牡丹品种繁殖，且种苗大小、长势等参差不齐，难以标准化或量化生产。为解决这些问题，牡丹组织培养技术被业界认可。观赏牡丹品种组织培养技术的研究论文于1984年首次在《科学通报》上公开发表(李玉龙等，1984)，其后英国、法国、意大利等外国科学家先后开展牡丹组织培养研究，在外植体选择、无菌培养体系建立、试管苗(不定芽)扩繁、不定根发生、小植株移栽驯化等阶段都取得不同程度进展，国内外有相关报道和专利申报。而在一个实验室建立完整(五个阶段)组织培养体系和实用技术仍然是理论探索。

牡丹组织培养存在的主要问题是：(1)外植体(鳞芽)表面消毒困难，不得不用剧毒消毒剂氯化汞，其残留对环境、操作者和培养材料等会有影响；(2)不定芽在培养基上容易褐化以至死亡；(3)试管苗生根困难，移栽驯化难以成活。小植株(生根试管苗)从实验室环境过渡到适应田间环境的过程中容易死亡，导致牡丹组织培养不能用于生产。

牡丹播种育苗和种苗移栽受季节严重限制，必须在秋季进行，否则种子沉睡在土里不能萌芽生长，荒废土地资源至翌年春季；移栽必须在秋季否则大部分植株死亡，这也限制了牡丹产业发展。