[发明专利]一种降低变异率的草莓茎尖脱毒组织培养方法

权利要求书

1.一种降低变异率的草莓茎尖脱毒组织培养方法，其特征在于，包括以 下步骤：

制备草莓不同基因型的通用诱导培养基和增殖培养基；

基于上述诱导培养基将草莓茎尖进行初代培养并检测筛选出无病毒植株 作为增殖母株；

将增殖母株进行增殖培养；

将经过增殖培养的增殖母株进行生根培养并进行驯化移栽。

2.如权利要求1所述的一种降低变异率的草莓茎尖脱毒组织培养方法， 其特征在于，所述制备草莓不同基因型的通用诱导培养基和增殖培养基的步 骤中，其中通用增殖培养基包括第一增殖培养基和第二增殖培养基，所述第 一增殖培养基由以下成分组成：MS培养基、6-BA0.5mg/L、IBA0.1mg/L， 所述第二增殖培养基由以下成分组成：MS培养基、6-BA0.3～0.4mg/L、IBA 0.1mg/L。

3.如权利要求2所述的一种降低变异率的草莓茎尖脱毒组织培养方法， 其特征在于，所述MS培养基中的NH₄NO₃添加量为原来的1/2。

4.如权利要求1所述的一种降低变异率的草莓茎尖脱毒组织培养方法， 其特征在于，所述基于上述诱导培养基将草莓茎尖进行初代培养并检测筛选 出无病毒植株作为增殖母株的步骤包括：

选择外植体；

剥取外植体的茎尖；

将外植体的茎尖进行初代培养；

通过病毒检测筛选出经过初代培养的植株作为增殖母株。

5.如权利要求4所述的一种降低变异率的草莓茎尖脱毒组织培养方法， 其特征在于，所述选择外植体的步骤包括：在6～8月份晴天的中午，选择无 病虫、品种纯正的健壮植株，切取带生长点的匍匐茎段2～3厘米，用流水冲 洗干净；所述剥取外植体的茎尖的步骤包括：将表面清洗过的外植体置于超 净工作台上，用70％乙醇表面消毒30秒，弃乙醇，加0.1％升汞消毒2分钟， 并不断摇动，然后用无菌水冲洗5～8次，用无菌滤纸吸干水分，再置于解剖 镜下用解剖刀切取0.2～0.3mm的茎尖。

6.如权利要求5所述的一种降低变异率的草莓茎尖脱毒组织培养方法， 其特征在于，所述将外植体的茎尖进行初代培养的步骤包括：将剥取的茎尖 接种于茎尖诱导培养基中，诱导培养至茎尖萌发1.5～2.0cm，然后转至新鲜培 养基中培养成苗。

7.如权利要求6所述的一种降低变异率的草莓茎尖脱毒组织培养方法， 其特征在于，所述通过病毒检测筛选出经过初代培养的植株作为增殖母株的 步骤包括：将经过培养成苗的植株取下部成熟叶片，提取总RNA或DNA， 反转录后用特异性引物分别进行PCR扩增SCV、SMoV、SVBV和SMYEV 的4种病毒的外壳蛋白基因，电泳检测有无扩增条带，筛选无病毒植株并作 为增殖母株，淘汰带病毒植株。

8.如权利要求1-7任一所述的一种降低变异率的草莓茎尖脱毒组织培养 方法，其特征在于，所述将增殖母株进行增殖培养的步骤包括：

步骤一：将增殖母株接种于第一增殖培养基上连续继代2次；

步骤二：将第一增殖培养基上连续继代2次的试管苗接种于第二增殖培 养基上并连续继代2次；

将步骤一、步骤二交替继代增殖培养2个循环达到总继代次数为8代。

9.如权利要求8所述的一种降低变异率的草莓茎尖脱毒组织培养方法， 其特征在于，所述将经过增殖培养的增殖母株进行生根培养并进行驯化移栽 的步骤包括：

选2～3厘米的经过增殖培养的小苗转入生根培养基进行生根培养；

将生根的组培瓶苗在自然光下炼苗4～7天，然后移栽到种苗穴盘中，植 株长到4～5片叶，株高4～5厘米，有10～12厘米长的根系6～7条，即可移出 定植于网室。

10.如权利要求8所述的一种降低变异率的草莓茎尖脱毒组织培养方法， 其特征在于，所述生根培养基由以下成分组成：1/2MS、0.1mg/LIBA，其中 MS培养基中的NH₄NO₃添加量为原来的1/2。