[发明专利]重组昆虫蜕皮激素失活基因Bbsp::egt及其杀虫真菌剂

说明书

本发明涉及一种重组昆虫蜕皮激素失活基因Bbsp::egt及其杀虫真菌剂，其含有编码球孢白僵菌（Beauveria bassiana）几丁质酶的信号肽序列(Bbsp)与编码舞毒蛾核型多角体病毒（Lymantria dispar nuclepolyhedrovirus，以下简称LdMNPV）蜕化类固醇尿苷5’‑二磷酸‑葡糖基转移酶基因(egt)，其具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列和如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。采用分子生物学技术转入球孢白僵菌（Beauveria bassiana）中获得正确遗传转化菌株。本发明所获得的重组Bbsp::egt菌株可干扰昆虫体内激素系统正常运作，降低昆虫对杀虫真菌球孢白僵菌的免疫抵抗能力，加速真菌对宿主的击倒，从而提高杀虫真菌毒力。

技术领域

本发明涉及一种新的重组蜕化类固醇尿苷5’-二磷酸-葡糖基转移酶编码基因Bbsp::egt，具体地说含有编码球孢白僵菌（Beauveria bassiana）几丁质酶的信号肽（Bbsp）和编码舞毒蛾核型多角体病毒（LdMNPV）蜕化类固醇尿苷5’-二磷酸-葡糖基转移酶基因(egt)的重组序列。

本发明涉及表达上述重组序列的真菌表达载体。

本发明还涉及表达上述重组载体的杀虫真菌剂。

背景技术

传统农业生产中频繁使用的DDT、除虫菊酯等化学杀虫剂大部分都会严重地改变生态系统结构，并对人体有害，甚至会集中在食物链中，对人类的健康产生潜在威胁。因此，在此背景下，对环境安全的生物杀虫剂受到人们越来越多的关注。真菌是控制自然界昆虫种群数量的主要因素，已被开发成为真菌杀虫剂，成为化学杀虫剂的重要补充。真菌杀虫剂具有对环境安全、可持续性强等优点。然而鉴于真菌杀虫活性的发挥需要一系列复杂的过程，真菌杀虫剂往往具有致死寄主速度慢，对环境条件要求高等缺点，严重制约了它农药市场的应用及推广（Harry C et al.,2014）。因此,如何提高这些生物杀虫剂的效率，并研究其作用机理已成为该领域的一个研究重点。

有研究表明，昆虫的生长发育及免疫反应受到体内蜕皮激素20E的调控。丛林等发现（丛林，2013），合成蜕皮激素的相关基因Nvd的突变，可造成幼虫取食停止，并在进入下一龄期前死亡；桔小实蝇突变体体内蜕皮激素的水平严重降低会导致胚胎后期的发育停滞，表皮不分化，头部不褪化，背合不全和后肠畸形环化甚至死亡。此外，20E也能提高昆虫的免疫或解毒能力。将外源20E处理6龄取食期棉铃虫，发现血细胞密度在处理12h后增加了2倍，细胞间的粘连作用增强，吞噬率提高了近15%（柴连琴，2015），暗示20E一定程度上参与了昆虫免疫反应的正调控。邹凤鸣（邹凤鸣，2010）发现，较高浓度20E处理家蚕后，体内参与内源性和外源性底物的解毒代谢的一类谷胱甘肽-S-转移酶（GSTs）表现出显著的上调表达，表明20E提高了昆虫的解毒能力。以上研究显示，蜕皮激素20E广泛参与了昆虫生长发育、免疫、解毒等生理生化反应，在体内滴度的降低可能导致昆虫的发育受阻或死亡。因此，如能在真菌侵染宿主的过程中降低昆虫体内20E水平，则可能会有助于真菌击倒宿主。来自LdMNPV病毒的egt基因产物能以昆虫蜕皮激素20E为底物，在其分子上添加糖基使20E失活，从而降低20E水平。

发明内容

针对现有技术存在的上述不足，本发明的目的在于提供一种重组昆虫蜕皮激素失活基因Bbsp:egt。

本发明还提供所述重组昆虫蜕皮激素失活基因Bbsp:egt应用于杀虫真菌剂，干扰宿主昆虫的相关激素水平，降低昆虫的免疫抵御能力，以此改良杀虫真菌球孢白僵菌的杀虫效力，解决昆虫病原真菌侵染效率低的问题。