[发明专利]一种定量检测含糖醛酸多糖的方法

权利要求书

1.一种定量检测含糖醛酸多糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，将已知的多糖配制成系列浓度的标准多糖溶液；

步骤2，提取待测样品中的多糖并配置成待测样品溶液；

步骤3，将标准溶液和待测样品溶液中的多糖水解，水解液使用冷冻离心浓缩反复操作除去溶剂，得到水解残余物；

步骤4，步骤3所得残余物用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮衍生化，真空冷冻离心减压反复操作除去溶剂，制备糖的衍生物；

步骤5，利用高效液相色谱仪和三重四极杆串联线性离子阱质谱仪对糖的衍生物进行分析；其中，液相色谱条件为：

色谱条件：高效液相色谱仪；Thermo scientific Hypersil GOLD，色谱柱规格：150×2.1mm，5μm；柱温30℃；流速0.5mL/min；流动相为20mmol乙酸铵水溶液(A)：乙腈(B)＝80:20等度洗脱；

步骤6，依据标准多糖混合溶液的MRM色谱图及待测样品溶液的MRM色谱图，利用色谱峰保留时间和监测离子丰度比确定待测样品为何种含糖醛酸多糖；

步骤7，根据高效液相色谱-质谱获得的标准多糖二糖衍生物的MRM色谱图，制定色谱峰面积与多糖浓度的标准曲线，利用待测样品的峰面积计算待测样品中含糖醛酸多糖的含量。

2.根据权利要求1所述的定量检测含糖醛酸多糖的方法，其特征在于，步骤1和步骤2中制备的标准多糖溶液、待测样品溶液中含有三氟乙酸；步骤3的具体过程为：标准品溶液、样品溶液密封，在105℃水解3h；酸水解液使用冷冻离心浓缩除去溶剂，再加入0.5mL甲醇，使用冷冻离心浓缩除去溶剂，以上操作重复三次，达到除酸目的。

3.根据权利要求2所述的定量检测含糖醛酸多糖的方法，其特征在于，步骤4的具体过程为：加入300μL的氨水溶解残渣，再加入300μL 0.3mol/L的1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)甲醇溶液，密封，70℃水浴30min，加入1mL甲醇，真空冷冻离心减压除去溶剂，重复三次；然后加入1mL水，再加入1mL的氯仿，震荡后除去氯仿，重复萃取三次，水层作为供试液。

4.根据权利要求3所述的定量检测含糖醛酸多糖的方法，其特征在于，质谱条件：离子源ESI源；正离子模式，监测不同种类多糖二糖片段衍生物的特征离子对。

5.根据权利要求4所述的定量检测含糖醛酸多糖的方法，其特征在于，所述特征离子对如下：687.30/511.20、686.30/492.10、686.30/525.20、686.30/510.12、687.30/373.00、687.30/187.00、686.30/175.00、686.30/187.00、687.30/175.00、686.30/373.00。

6.根据权利要求1-4任一项所述的定量检测含糖醛酸多糖的方法，其特征在于，所述含糖醛酸多糖为具有一个糖醛酸与一个氨基己糖或己糖组成的重复二糖片段的多糖。

7.根据权利要求6所述的定量检测含糖醛酸多糖的方法，其特征在于，步骤1中所述已知多糖为硫酸软骨素、肝素、透明质酸或鲍鱼多糖AGSP。