[发明专利]T型钙离子通道抑制剂NNC55-0396在制备抗神经退行性疾病药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种T型钙离子通道抑制剂NNC55-0396(CAS:357400-13-6)在制备抗 神经退行性疾病药物中的应用；属生物医学领域。

背景技术

细胞自噬是生物体内一种用于清除功能异常的细胞器、错误折叠的蛋白质、被氧化 的脂类等有害大分子物质的重要途径。它的机制从低等生物酵母到高等的哺乳动物都高 度保守，对维持正常的生命活动至关重要。细胞自噬包括三种方式，即巨自噬 (macroautophagy)、微自噬(microautophagy)及伴侣分子介导的自噬(chaperone-mediated autophagy)。由于大自噬是自噬的主要途径，故本文所述及的自噬均仅指大自噬。

错误折叠的蛋白质若不能被有效清除，就会造成积聚，致使神经细胞功能丧失乃至 死亡，这是神经退行性疾病包括阿尔茨海默症(Alzheimer'sdisease,AD)的主要原因。 阿尔茨海默症(AD)的主要特征是β-淀粉样蛋白(Aβ)的积聚。细胞内Aβ的产生和清 除对阿尔茨海默症的发病显得十分重要。在阿尔茨海默症中，细胞自噬受到损伤，核内 质溶酶体途径出现异常。而自噬的药理学活化作用可以促进Aβ的清除，进而减轻AD症 状，因此研究调控自噬对阿尔茨海默症的早期干预有重要意义(刘知学等，2012)。

化合物NNC55-0396(CAS:357400-13-6)是药物Mibefradil的衍生物，是一种高选 择性的T型钙离子通道抑制剂，广泛应用于肿瘤、糖尿病等研究，也有研究发现其与胚 胎神经发育相关。但是NNC55-0396对于诱导细胞自噬，用于制备抗神经退行性疾病药 物方面的研究，经权威机构检索查新，目前国内外尚未见报道。鉴于此，研究化合物 NNC55-0396对诱导细胞自噬、改善认知功能障碍，制备抗神经退行性疾病药物中的应用 具有重要意义。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明要解决的问题是提供一种T型钙离子通道抑制剂 NNC55-0396(CAS:357400-13-6)在制备抗神经退行性疾病药物中的应用。

本发明所述T型钙离子通道抑制剂NNC55-0396在制备抗神经退行性疾病药物中的 应用。

其中：所述T型钙离子通道抑制剂NNC55-0396的化学结构如通式(I)所示，其化学 命名为：(1s,2s)-2-(2-(N-[3-(2-1H-苯并咪唑基)丙基]-N-甲胺基)乙基)-6-氟-1,2,3,4-四氢-1- 异丙基-2-萘酚-环丙基甲酸酯；所述神经退化性疾病优选是阿尔兹海默病。

本发明运用野生型神经胶质细胞U87MG细胞及LC3被绿色荧光蛋白(GFP)转染的神 经胶质细胞U87MG细胞(简称LC3-GFP-U87细胞)，对T型钙离子通道抑制剂 NNC55-0396进行了在影响细胞自噬及其关联的认知功能障碍等疾病方面的研究，证实： 所述T型钙离子通道抑制剂NNC55-0396在增强细胞自噬来改善认知功能障碍中具有明 显作用，并确定所述T型钙离子通道抑制剂NNC55-0396能有效诱导引发细胞自噬的浓 度为5μM。

为了更好的理解本发明的实质及本发明所述化合物的作用，下面结合NNC55-0396 的药理实验及结果，来进一步阐述其在增强细胞自噬中的作用。

神经胶质瘤细胞的制备：以常规方法培养野生型神经胶质细胞U87MG细胞及LC3 被绿色荧光蛋白(GFP)转染的神经胶质细胞U87MG细胞(简称LC3-GFP-U87细胞)，收 集生长状态良好的且处于对数期的细胞，备用。

采用细胞生物学和分子生物学方法进行如下实验，以观察NNC55-0396对 LC3-GFP-U87细胞和野生型神经胶质细胞U87MG自噬的影响。

1.绿色荧光蛋白-自噬过程特征蛋白GFP-LC3方法检测细胞生长情况，以判断 NNC55-0396对细胞自噬的影响

将处于对数生长期的LC3-GFP-U87细胞接种于96孔板中，经5μM的NNC55-0396 作用24小时后，用荧光倒置显微镜观察LC3蛋白的变化，结果发现实验组较对照组出 现大量荧光斑点，说明细胞产生自噬小体，LC3聚集在自噬小体内，形成荧光斑点，证 明了自噬的发生(见图1)。