[发明专利]一种水中肠道病毒分离纯化方法

权利要求书

1.一种水中肠道病毒分离纯化方法，其特征在于一种水中肠道病毒分离纯化方法是采 用专利号201410234128.4公开的装置进行的，具体步骤如下：

步骤一、将水样装入存储罐中，闭合顶盖；

步骤二、然后通入氮气调节存储罐内的压力，打开控制阀，使水样通过过滤器流向滤膜 支架；

步骤三、待水样全部通过滤膜支架内的正电荷滤膜后停止进样，关闭氮气存储罐，使罐 体泄压；

步骤四、更换新的存储罐，向新的存储罐中加入1L质量浓度为1％的多聚磷酸钠溶液， 通入氮气使存储罐内的压力上升至0.7个标准大气压；

步骤五、打开控制阀，使多聚磷酸钠溶液流向滤膜支架进行洗脱，通过放水管收集洗脱 液，待全部通过滤膜支架内的正电荷滤膜后停止洗脱；

步骤六、将滤液杯安装于带有样品杯的Plus-70滤芯上，组装成两套离心杯， 然后用去离子水预润洗；

步骤七、取步骤五获得的洗脱液120ml分成两等份，然后分别装入两套离心杯的样品杯 中，再将两套离心杯对称放置在离心机内，离心10分钟，取出两套离心杯后将两个样品杯分 别由滤液杯上取下，弃去两个滤液杯中过滤液；

步骤八、重复步骤七直至步骤五收集的洗脱液全部过滤完毕；

步骤九、将经步骤八处理后的两个带有样品的Plus-70滤芯分别与收集杯组 装成两套收集装置，然后对称置于离心机中，离心2分钟，然后合并两个收集杯中样本，再用 MEM培养基稀释至1mL，移至离心管内-70℃保藏备用。

2.根据权利要求1所述的一种水中肠道病毒分离纯化方法，其特征在于步骤四所述多 聚磷酸钠溶液是由3.8mmol/LNa₂HPO₄、6.5mmol/LKH₂PO₄、0.05mol/L氨基乙酸(glycine)和 去离子水配制的。

3.根据权利要求1所述的一种水中肠道病毒分离纯化方法，其特征在于步骤七中在离 心力为1900×g条件下离心。

4.根据权利要求1所述的一种水中肠道病毒分离纯化方法，其特征在于步骤九中在离 心力为800×g条件下离心。

5.一种水中肠道病毒分离纯化方法，其特征在于一种水中肠道病毒分离纯化方法是由 下述步骤完成的：

步骤1、将滤液杯安装于带有样品杯的Plus-70滤芯上，组装成两套离心杯， 然后用去离子水预润洗；

步骤2、向1L纯水中投入肠道病毒样本得到水样，取水样120mL分成两等分，然后分别装 入两套离心杯的样品杯中后盖盖，再将两套离心杯对称放置在离心机内，离心10分钟，取出 两套离心杯后将两个样品杯分别由滤液杯上取下，弃去两个滤液杯中过滤液；

步骤3、重复步骤2直至样本全部过滤完毕，收集样本；

步骤4、将经步骤3处理后的两个带有样品的Plus-70滤芯与收集杯组成两套 收集装置，然后对称置于离心机中，离心2分钟，然后合并两个收集杯中样本，再用MEM培养 基稀释至1mL，移至离心管内-70℃保藏备用。

6.根据权利要求5所述的一种水中肠道病毒分离纯化方法，其特征在于步骤2中在离心 力为1900×g条件下离心。

7.根据权利要求5所述的一种水中肠道病毒分离纯化方法，其特征在于步骤4中在离心 力为800×g条件下离心。

8.根据权利要求5所述的一种水中肠道病毒分离纯化方法，其特征在于步骤2中肠道病 毒样本按下述投入量投加：1L纯水中诺如病毒的投入量1.47E+03～1.47E+07；1L纯水中轮 状病毒1.06E+03～1.06E+07；1L纯水中星状病毒2.07E+02～2.07E+06；1L纯水中科萨奇病 毒3.50E+01～3.50E+06；1L纯水中肠道腺病毒3.60E+02～3.60E+07。