[发明专利]一种花叶芋体细胞无性系变异的选育方法

权利要求书

1.一种花叶芋体细胞无性系变异选育方法的培养基，由以下三部分组成：

1）诱导培养基：在MS培养基的基础上，添加0.5～2mg/L的6-BA、0.1～2mg/L的2,4-D、20～40g/L蔗糖和6～8g/L卡拉胶，pH5.6～6.0；

2）分化培养基：在MS培养基的基础上，添加1～3mg/L的6-BA、0.1～1mg/L的NAA、20～40g/L蔗糖和6～8g/L卡拉胶，pH5.6～6.0；

3）生根壮苗培养基：在MS培养基的基础上，添加0.1～1mg/L的NAA、20～40g/L蔗糖和6～8g/L卡拉胶，pH5.6～6.0。

2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于：由以下三部分组成：

1）诱导培养基：在MS培养基的基础上，添加0.5～2mg/L的6-BA、0.1～1mg/L的2,4-D、25～35g/L蔗糖和6～8g/L卡拉胶，pH5.8～6.0；

2）分化培养基：在MS培养基的基础上，添加1～2mg/L的6-BA、0.1～0.5mg/L的NAA、25～35g/L蔗糖和6～8g/L卡拉胶，pH5.8～6.0；

3）生根壮苗培养基：在MS培养基的基础上，添加0.1～0.5mg/L的NAA、25～35g/L蔗糖和6～8g/L卡拉胶，pH5.8～6.0。

3.一种花叶芋体细胞无性系变异的选育方法，其特征在于，包括下列步骤：

（1）培养基的配制：配置权利要求1或2所述的培养基；

（2）外植体的选择和消毒处理：选取尚未展开的幼嫩叶片和叶柄为外植体，对其进行消毒处理；

（3）愈伤组织诱导培养：将消毒处理后的叶片切成1～2cm小段，接种于诱导培养基中黑暗培养；

（4）分化培养：将诱导产生的愈伤组织转接至分化培养基中，诱导分化出芽；

（5）生根壮苗培养：当芽长至1.8～2.5cm时，切分成小块，转接到生根壮苗培养基中诱导生根，长成幼苗；

（6）移栽炼苗：当幼苗长至4～5cm时，将培养瓶移至温室大棚中炼苗5～8天后，将试管苗取出，冲洗干净，栽种于穴盘中；待植株长到有3-4片叶时，将苗移栽上盆；

（7）变异单株的选择：从亲本的无性系后代群体中，筛选出性状独特的变异单株，并采用流式细胞仪对变异单株的细胞DNA含量进行测定和分析，变异单株的峰值位置为亲本的1.6～2.2倍，确定变异单株由亲本染色体加倍引起，能够稳定遗传，为花叶芋的优选单株；

（8）优选单株的无性系后代群体的建立：取优选单株的幼嫩叶片为外植体，进行组培扩繁，并以亲本为对照，对植株生长、叶片、块茎和生长势等主要性状，进行多年多点试验调查，验证优选单株后代群体的特异性、一致性和稳定性；

（9）新品种的培育：经品种比较试验调查，后代群体植株具有独特的观赏性状，形成性状和表现一致的群体，符合育种目标，定为新品种。

4.根据权利要求3所述的选育方法，其特征在于：步骤（2）中的外植体的消毒处理步骤为70%乙醇浸泡30s，无菌水冲洗2次，0.1%升汞浸泡8-10min，最后用无菌水漂洗5次。

5.根据权利要求3所述的选育方法，其特征在于：步骤（4）中分化培养的条件为光照强度为800～1000lux，光照时间为每天11～13小时。

6.根据权利要求3所述的选育方法，其特征在于：步骤（6）中穴盘中的基质为高要泥炭︰珍珠岩的质量比为3︰1的混合基质。

7.根据权利要求3所述的选育方法，其特征在于：步骤（7）中筛选变异单株的标准包括：叶片变圆形、质地变硬、叶柄变粗壮和/或株型变矮。

8.根据权利要求3所述的选育方法，其特征在于：步骤（7）中变异单株采用流式细胞仪对变异单株的细胞DNA含量进行测定和分析，变异单株的峰值位置为亲本的1.8～2倍，确定为花叶芋的优选单株。

9.根据权利要求3所述的选育方法，其特征在于：花叶芋品种选自‘玫瑰花蕾’、‘福利达’、‘白鹭’、‘凯瑟琳’、‘迷你白’、‘金哲兰’。

10.根据权利要求3所述的选育方法，其特征在于：花叶芋品种为‘玫瑰花蕾’或‘福利达’。