[发明专利]一种何首乌叶片诱导培养基及其配制方法

说明书

技术领域

本发明涉及何首乌组织培养技术领域，特别是涉及一种何首乌叶片诱导培养基， 还涉及一种何首乌叶片诱导培养基配制方法。

背景技术

何首乌，是蓼科何首乌属多年生缠绕藤本植物，块根肥厚，长椭圆形，黑褐色，其块 根入药，可安神、养血、活络、消痈，是常见的中药材。

目前何首乌人工繁殖主要采用扦插和组织培养，现有的何首乌组织培养技术多以 茎段和茎尖作为外植体，但是以茎尖和茎段作为外植体不仅仅对母体伤害大，而且取材不 容易。

发明内容

基于现有技术存在上述问题，本发明提供一种何首乌叶片诱导培养基，该培养基 以MS培养基为基础培养基，并添加有TDZ（噻苯隆）、6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)、IBA（吲哚丁 酸）、椰乳、琼脂粉、蔗糖，以何首乌叶片作为外置体，不仅仅取材容易简单，还能降低取材对 母体的伤害，同时本培养基还具有诱导率高的优点。

一种何首乌叶片诱导培养基，其以MS培养基为基础培养基，并添加有TDZ（噻苯 隆）、6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)、IBA（吲哚丁酸）、椰乳、琼脂粉、蔗糖，椰乳为椰子的液态胚乳， 具有多种植物生长所需的营养物质和调节物质，能更好地促进何首乌叶片脱分化，诱导出 愈伤组织。

TDZ（噻苯隆）的浓度为0.001-0.01mg/L，6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)的浓度为1- 1.5mg/L，IBA（吲哚丁酸）的浓度为0.2-0.8mg/L，椰乳的浓度为150-200mg/L，琼脂粉的浓 度为8～11g/L，蔗糖的浓度为25～35g/L。

TDZ（噻苯隆）的浓度为0.004-0.006mg/L，6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)的浓度为1.2- 1.4mg/L，IBA（吲哚丁酸）的浓度为0.4-0.6mg/L，椰乳的浓度为180-190mg/L，琼脂粉的浓 度为9～10g/L，蔗糖的浓度为28～32g/L。

何首乌叶片诱导培养基的pH值为5.8~6.5。

何首乌叶片诱导培养基的pH值为6.3，微酸性的组培环境有利于提高脱分化相关 酶类的活性，诱导何首乌叶片长出愈伤组织。

椰乳是从没成熟的椰汁果实中采集，成熟的椰子果实已经消耗了部分椰乳中的营 养物质，改变了椰乳的成分。

一种何首乌叶片诱导培养基的配制方法，其包括以下步骤：

步骤S10溶解配制培养基：用蒸馏水溶解MS基础培养基各成分，并添加TDZ（噻苯隆）、6- BA(6-苄氨基腺嘌呤)、IBA（吲哚丁酸）、椰乳、琼脂粉、蔗糖；

步骤S20高温灭菌：将步骤S10配制好的培养基放于高压灭菌锅中，于120~121℃高温灭 菌20~21分钟，冷却凝固。

步骤S10还包括步骤S11调节pH值：使用HCL和KOH滴定调节培养基pH值至6.3。

具体实施方式

实施例一：配制何首乌叶片诱导培养基。

根据表1所示的MS培养基配方以及表2所示的何首乌叶片诱导培养基配方，配制本 发明所述的何首乌叶片诱导培养基。

用天平称取MS培养基中的各成分以及TDZ（噻苯隆）、6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)、IBA （吲哚丁酸）、椰乳、琼脂粉、蔗糖，置于三角瓶中，加入适量蒸馏水，搅拌溶解，并调节pH值至 6.3，定容至1000mL。将三角瓶封口，置于高压灭菌锅中，于121℃灭菌20min，然后置于超净 工作台中自然冷却，备用。

将冷却到50-60℃时将培养基分装至组织培养瓶中，晾凉，待其凝固后将组织培养 瓶封口，备用。

表1MS培养基的成分及其用量。

表2何首乌叶片诱导培养基的成分及其用量。

实施例二：本发明所述的何首乌叶片诱导培养基的测试

根据表1所示的MS培养基配方以及表3所示的何首乌叶片诱导培养基配方，参照实施例 一所述的培养基制备方法，分别配制各试验组、对照组的何首乌叶片诱导培养基。

表3何首乌叶片诱导培养基。

备注：对照组1为现有技术对照组，采用何首乌茎段作为外植体。