[发明专利]一种检测内切酶的电化学发光生物传感器及其制备与应用

说明书

本发明涉及一种检测内切酶的电化学发光生物传感器及其制备与应用，包括以下步骤：S01.对玻碳电极进行预处理；S02.采用循环伏安法制备金纳米‑石墨烯修饰的玻碳电极；S03.分别制备浓度为1～10μM的Ru(bpy)32+标记的B‑DNA信标，和浓度为1～10μM的二茂铁标记的C‑DNA信标；S04.将所述步骤S02所得到金纳米‑石墨烯修饰的玻碳电极浸入含有巯基修饰的A‑DNA中培育3～6 h，然后依次浸入步骤S03所得Ru(bpy)32+标记的B‑DNA信标和二茂铁标记的C‑DNA信标20～40min。可以用来检测内切酶EcoRI和ApaI。本发明的传感器具有良好的稳定性、重现、对内切酶EcoRI和ApaI具有很高的特异性，不易收到检测样品中其他物质的干扰；灵敏度极强；而且检测时操作简单方便快速，对抗菌抗病毒药物的研发有一定的帮助。

技术领域

本发明涉及分析化学与电化学发光传感器分析领域，具体涉及一种基于金纳米-石墨烯复合材料的检测内切酶的电化学发光生物传感器及其制备方法与应用。

背景技术

内切酶，是一类主要存在原核生物中的核酸。它作为分子剪刀闻名，并用于在特定的位置来剪切磷酸酯键。内切酶已经被广泛用于PCR实验、基因谱、医药化学、催化放大技术等。内切酶在原核生物中起到保护生物内在的基因抵抗外来基因的作用。因此内切酶被认为是在新的抗菌、抗病毒药物的发现领域中重要的目标物质。

目前对内切酶检测的研究的方法包括高效液相发、荧光共振转移、基于金纳米颗粒的比色法等等。虽然这些方法能够很准确的检测内切酶，但是他们都存在一些缺点比如需要复杂的设备，复杂的处理过程，昂贵的价格等等。

电化学发光（ECL）综合了电化学和化学发光的优点即低背景、容易控制和检测，最近已经在生物传感器领域内得到了很好的发展。尤其是基于猝灭或者是增强三联吡啶钌（Ru(bpy)32+）/三正丙胺（TPrA）的电化学发光的强度，已经被很好的研究了。

已经有很多方法用来制备石墨烯，在这些方法中化学还原氧化石墨烯（GO）是最方便的方法。这中方法可以得到大量的石墨烯片。然而由于无论是在溶液中还在干粉的石墨烯都很溶液团聚，这个现象大大阻碍了石墨烯的实际应用。在石墨烯片层结构中引入纳米金属，最开始是为了分开单层的石墨烯。然而现在，人们已经认识到在石墨烯上沉积金属纳米颗粒也可能生成新的催化材料、磁性材料、导电材料等。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测内切酶的电化学发光生物传感器及其制备与应用一解决目前对内切酶的检测设备和处理过程复杂、价格昂贵等问题。

一种检测内切酶的电化学发光生物传感器的制备方法，包括以下步骤：

S01.对玻碳电极进行预处理；

S02.采用循环伏安法制备金纳米-石墨烯修饰的玻碳电极；

S03.分别制备浓度为1～10 μM的 Ru(bpy)32+标记的B-DNA信标，和浓度为1～10 μM的二茂铁标记的C-DNA信标；

S04.将所述步骤S02所得到金纳米-石墨烯修饰的玻碳电极浸入含有巯基修饰的A-DNA中培育3～6 h，然后依次浸入步骤S03所得Ru(bpy)32+标记的B-DNA信标和二茂铁标记的C-DNA信标20～40min，即得到检测内切酶的电化学发光生物传感器。