[发明专利]慢性进程性帕金森病恒河猴模型的建立方法

说明书

技术领域

本发明属于生命科学技术领域，具体涉及慢性进程性帕金森病恒河猴模型的建立方法。

背景技术：

帕金森病(Parkinson's disease,PD)，又称“震颤麻痹”，是一种仅次于阿尔茨海默病的第二大中枢神经系统退行性疾病，主要临床表现为静止性、意向性或姿势性震颤，肌肉强直、运动迟缓和姿势平衡障碍等，并以黑质致密部多巴胺(dopamine,DA)能神经元严重变性缺失和脑内残存的DA能神经元内出现路易小体(lewy body,LB)为病理特点。酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase，TH)作为多巴胺合成的限速酶，其表达量可作为多巴胺能神经元活性指标D主要发生于60岁以上的老龄人群，发病率达1％-2％，40岁以上人群发病率超过0.1％。PD不仅发病率高，早期诊断困难，黑质多巴胺能神经元损伤高达70％才会出现运动障碍和典型临床症状，病人经左旋多巴类药物治疗后多出现不同程度的致残现象，严重损害老年人的身体健康和影响老年人的日常生活，给家庭和社会带来沉重的经济负担。随着人口平均寿命的延长和老龄化的出现，PD的发病率出现上升趋势，引起各国学者的高度重视。

目前对PD病因学和发病机理的大部分认知，都来源于动物模型研究。因此建立一种理想的模拟PD患者缓慢病理进程、生理生化等特点的动物模型，对人类帕金森病的新药开发、早期诊断、疗效追踪等有非凡的意义。

到目前为止，已经用于该项研究的实验动物有大鼠、小鼠、猫、非人灵长类等，但无论从生理结构、生化特点、病理特征等方面来看，只有非人灵长类动物模型能够真正模拟人类PD发病机制及进程。至今，选用灵长类动物制作PD模型的方法多种多样，有急性偏侧损毁模型，包括外周静脉、颈总动脉、颈内动脉等注射造模试剂，急性双侧损毁模型，如腹腔、肌肉注射造模试剂，和亚急性或慢性系统性损毁模型，如肌肉注射、鼻内喷雾造模试剂等，每种造模方式优缺点各异，需根据研究目的而选择最适造模方式。由于帕金森病及其模型的的诊断主要依靠行为学评价，但目前行为学评分标准参差不齐，侧重点各异，没有一套完善的专门针对灵长类PD模型临床评分标准；另外，目前的灵长类模型不能模拟静止性震颤、路易小体，模型呈线性恢复等缺点。

发明内容

针对上述技术问题，本发明的技术方案提供了一种稳定的、慢性、进程性、系统性灵长类帕金森病模型的制备方法，为帕金森病的临床前研究及新药评价提供动物模型与科研平台。

具体技术方案为：

慢性进程性帕金森病恒河猴模型的建立方法，包括以下过程：

利用肌肉注射为主、静脉注射MPTP为辅，根据动物敏感性差异，从最小小剂量开始、逐渐加大剂量，长时间注射MPTP干预方式，缓慢刺激猕猴产生PD所有临床症状；具体步骤：

给恒河猴注射MPTP，每天一次，剂量从最小剂量0.2mg/kg开始施用，根据个体敏感性差异，对不敏感者逐渐缓慢加大剂量，最大剂量为0.5mg/kg，直至出现典型、稳定的PD临床症状，即病情不加重、不减轻；MPTP施用方法为肌肉注射、静脉注射联合运用的方法；最后一周改用静脉注射的方式施用MPTP，以巩固PD症状。在注射MPTP期间，对恒河猴每天做2次行为学评价，将一周的评分均值作为该周的最后得分。

因青年猴代偿能力较强，在出现PD典型临床症状，包括震颤、运动迟缓、姿势僵硬等后，一旦停止MPTP注射，动物行为学表现将会线性恢复接近正常水平，因此，在模型动物出现PD典型临床症状后，每隔1-3天施用一次MPTP，以小幅度持续损伤刺激动物，让其维持症状直至症状稳定存在。

对于不敏感动物，小剂量的MPTP注射，虽能复制出活动量减少、运动迟缓、姿势步态僵硬、发声减少、嗜睡等PD临床症状，但很难出现明显的震颤症状，故需在不影响动物生活自理能力的情况下，逐渐加大剂量至出现明显的震颤，方能停止加大剂量。

最初的MPTP施用方法为肌肉注射、静脉注射联合运用的方法，即肌肉注射为主，静脉注射为辅，四肢轮流交替注射的方法。小剂量、多次重复施用MPTP，是为了复制PD慢性进程性发病过程，而最后一周采用静脉注射MPTP方式，是为了巩固PD症状，以保证临床症状能够长期稳定的维持。

行为学评价方法，包括运动功能评分和经典的Kurlan评价量表；

行为学观察采用全天摄像、人工描计、人为刺激相结合的方法。