[发明专利]一种提升破伤风梭状芽孢杆菌产毒能力的培养基

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种提升破伤风梭状芽孢杆菌产毒能力的培养基。

背景技术

破伤风梭状芽孢杆菌(Clostridiumtetani)产毒培养基是破伤风类毒素制备过程中的关键 因素之一，所以，培养基的质量直接影响破伤风类毒素疫苗的质量和产量。

《微生物培养基的制造与应用》陈天寿主编，1995年第一版中所阐述铁(Fe)是过氧化氢 酶、过氧化物酶、细胞色素、细胞色素氧化酶的组成部分，缺铁时这些酶的合成会受到影响， 营养菌(破伤风梭状芽孢杆菌)的生长也需要铁最适合的浓度为0.5-0.6mg/L。铁对细菌毒素 也很重要，只在一定浓度范围内才能产毒。例如白喉菌在含铁0.14mg/L的培养基中，毒素量 最高，铁的浓度达到0.6mg/L时，则完全不产毒。

同时《微生物培养基的制造与应用》陈天寿主编，1995年第一版中还阐述酵母透析液(Yeast Dialyyzate)成分：酵母粉可配制流脑菌、百日咳菌、破伤风梭状芽孢杆菌培养基。

根据以上资料制备破伤风梭状芽孢杆菌产毒培养基的常用配方是：乳酪消化液总氮1000 毫克、牛肉胃酶消化液总氮1000毫克、纯化水约770毫升、醋酸钠5克、KH₂PO₄1克、 Na₂HPO₄·12H₂O1克、甘油60毫升、葡萄糖2.5克、Ⅰ号溶液5毫升、Ⅱ号溶液2毫升、酵母透 析液30毫升、FeCl₃·6H₂O0.03克、活性炭2克。

附:Ⅰ号溶液1000毫升的配方：硫胺素0.3克、核黄素0.3克、吡哆醇0.3克、苯多酸钙1.2 克、生物素4毫克、无水乙醇250毫升、纯化水加至1000毫升。

Ⅱ号溶液1000毫升的配方：烟草酸0.25克、胱氨酸75克、尿嘧啶2.5克、盐酸150毫升、硫 酸锌10克、MgSO₄·2H₂O50克、纯化水加至1000毫升。

上述培养基存在破伤风发酵产毒能力低，导致难提纯，收率低，效价低的问题，使用该 配方的培养基发酵后，产毒在40-50Lf/ml。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有的破伤风梭状芽孢杆菌培养基在使用过程中，发酵 产毒能力低，难提纯，收率低，效价低的问题。

为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的。

1.一种提升破伤风梭状芽孢杆菌产毒能力的培养基，由以下组分及其含量组成：

牛肉胃酶消化液总氮1.00g/L±0.05g/L，乳酪消化液总氮1.00g/L±0.05g/L，醋酸钠 5.0g/L±0.1g/L，磷酸氢二钠1.00g/L±0.05g/L，磷酸二氢钾1.00g/L±0.05g/L，甘 油60ml/L±2ml/L，葡萄糖2.5g/L±0.1g/L，Ⅰ号因子5.0ml/L±0.1ml/L，Ⅱ号因子 2.00ml/L±0.05ml/L，酵母浸粉5.0g/L±0.1g/L，FeCl₃·6H₂O0.025g/L±0.001g/L， 溶剂为纯化水；

所述的Ⅰ号因子由以下组分及其含量组成：

维生素B10.3g/L±0.01g/L，维生素B20.3g/L±0.01g/L，维生素B60.3g/L±0.01g/L， 泛酸钙1.2g/L±0.06g/L，生物素0.004g/L±0.001g/L，无水乙醇250ml/L±10ml/L，溶剂为纯化 水；

所述的Ⅱ号因子由以下组分及其含量组成：

烟酸2.5g/L±0.1g/L，尿嘧啶2.5g/L±0.1g/L，L-胱氨酸75g/L±1g/L，ZnSO₄10.0 g/L±0.5g/L，MgSO₄38.4g/L±0.5g/L，浓盐酸150ml/L±10ml/L，溶剂为纯化水。