[发明专利]将干细胞分化为肝细胞谱系的方法

权利要求书

1.一种将定形内胚层(DE)谱系细胞分化为后前肠谱系的方法，其包括使所述干细胞与一种或多种视黄酸活化剂；和/或一种或多种TGFβ信号传导抑制剂接触。

2.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括使所述干细胞与一种或多种BMP信号传导活化剂接触。

3.根据权利要求1到2中任一项所述的方法，其进一步包括使所述干细胞与一种或多种FGF信号传导活化剂接触。

4.根据权利要求1到3中任一项所述的方法，其中相对于未分化细胞，所述后前肠谱系细胞包括后前肠谱系标志物的升高的基因表达和背部前肠标志物的降低表达。

5.根据权利要求1到4中任一项所述的方法，其中所述方法的持续时间为约1到84小时。

6.一种将后前肠谱系细胞分化为肝芽祖细胞的方法，其包括使所述后前肠谱系细胞与一种或多种TGFβ信号传导活化剂、一种或多种Wnt信号传导调节剂；和/或一种或多种环AMP/PKA信号传导活化剂接触。

7.根据权利要求6所述的方法，其进一步包括使所述后前肠谱系细胞与一种或多种BMP信号传导活化剂接触。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其中相对于未分化细胞，所述肝芽祖细胞包括肝芽祖细胞标志物的升高的基因表达和胰腺祖细胞标志物的降低表达。

9.根据权利要求8所述的方法，其中相对于未分化细胞，所述肝芽祖细胞包括包含AFP、TBX3、HNF4A PROX1、HNF1B、HNF6、CEBPAα或其组合的标志物的升高的基因表达。

10.根据权利要求6到9中任一项所述的方法，其中所述一种或多种Wnt信号传导调节剂包括Wnt信号传导抑制剂和/或Wnt信号传导活化剂。

11.根据权利要求10所述的方法，其中使所述Wnt信号传导抑制剂与所述后前肠谱系细胞接触约1到72小时的持续时间，随后使所述Wnt信号传导活化剂与所述后前肠谱系细胞接触约24到48小时的持续时间。

12.根据权利要求6到11中任一项所述的方法，其中所述方法的持续时间为约1到120小时。

13.根据权利要求6到12中任一项所述的方法，其中从根据权利要求1到5中任一项所述的方法获得所述后前肠谱系的所述细胞。

14.一种将肝芽祖细胞分化为肝祖细胞的方法，其包括使所述肝芽祖细胞与一种或多种TGFβ信号传导抑制剂；一种或多种FGF信号传导抑制剂；和/或一种或多种Notch信号传导抑制剂接触。

15.根据权利要求14所述的方法，其进一步包括使所述细胞与一种或多种Notch信号传导抑制剂；一种或多种抗坏血酸信号传导活化剂、一种或多种环AMP/PKA信号传导活化剂；和/或一种或多种胰岛素信号传导活化剂接触。

16.根据权利要求14所述的方法，其中接触的持续时间为约48小时。

17.根据权利要求15所述的方法，其中接触的持续时间为至少1到108小时。

18.根据权利要求14所述的方法，其进一步包括使所述肝芽祖细胞与一种或多种分化因子接触，所述分化因子选自包括以下的组：抗坏血酸信号传导活化剂；糖皮质激素信号传导活化剂；环AMP/PKA信号传导活化剂；胰岛素信号传导活化剂；制瘤素M信号传导活化剂；氨基酸混合物、和/或L-谷胱甘肽信号传导活化剂。

19.根据权利要求15所述的方法，其进一步包括使从权利要求14获得的细胞与一种或多种分化因子接触，所述分化因子选自包括以下的组：BMP信号传导活化剂；PKG信号传导抑制剂；糖皮质激素信号传导活化剂；磷脂前体；制瘤素M信号传导活化剂；氨基酸混合物、和L-谷胱甘肽信号传导活化剂。

20.根据权利要求14到19中任一项所述的方法，其中相对于未分化细胞，所述肝祖细胞包括肝标志物的升高的基因表达和胆标志物的降低表达。

21.根据权利要求20所述的方法，其中相对于未分化细胞，所述肝祖细胞包括包含白蛋白、c-MET、HNF4A、CEBPA或其组合的标志物的升高的基因表达。