[发明专利]用于生产蛋白质的经改进的宿主细胞

权利要求书

1.细菌宿主细胞，其中所述宿主细胞包含插入在所述宿主细胞基因组中的至少2个染色体拷贝的编码相同的毒物蛋白的核酸序列，和至少1个拷贝的编码针对所述毒物蛋白的解毒剂蛋白的核酸序列，条件是所述至少2个拷贝在与编码针对所述毒物蛋白的解毒剂蛋白的所述核酸序列不同的复制子中，其中所述毒物蛋白是CcdB，所述解毒剂蛋白是CcdA，并且其中编码所述解毒剂蛋白的所述核酸序列由质粒携带，所述质粒还包含其中插入有或能够插入有编码目的重组肽、多肽或蛋白质的核酸序列的表达系统，其中第二拷贝的编码所述毒物蛋白的核酸序列在所述宿主细胞基因组中的插入提高了所述目的重组肽、多肽或蛋白质的生产产率。

2.根据权利要求1所述的细菌宿主细胞，其中所述CcdB毒物蛋白由SEQ ID NO:1编码。

3.根据权利要求1或2所述的细菌宿主细胞，其中所述CcdA解毒剂蛋白由SEQ ID NO:13编码。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的细菌宿主细胞，其中所述表达系统包含选自包括T7启动子、Ptrc、Para和Plac的组的启动子。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的细菌宿主细胞，其中所述表达系统包含T7启动子，并且所述宿主细胞还包含T7 RNA聚合酶基因。

6.根据权利要求5所述的细菌宿主细胞，其中所述T7 RNA聚合酶基因插入在所述宿主细胞的基因组中。

7.根据权利要求5所述的细菌宿主细胞，其中所述T7 RNA聚合酶基因插入在T7表达系统中。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的细菌宿主细胞，其中所述表达系统包含T7启动子，并且所述宿主细胞还包含插入在其基因组中的经遗传修饰噬菌体。

9.根据权利要求8所述的细菌宿主细胞，其中所述噬菌体限定为以下噬菌体，其中：

-插入T7表达系统，

-S、R和/或Q基因失活，并且

-Int和/或Xis基因失活。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的细菌宿主细胞，其是革兰氏阴性细菌。

11.根据权利要求10所述的细菌宿主细胞，其是肠杆菌科(Enterobacteriacea)。

12.根据权利要求11所述的细菌宿主细胞，其是大肠杆菌(E.coli)。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的细菌宿主细胞，其还包含基因tonA、galK、araB、araA、lon、ompT、rcsA、hsdR、mrr、endA和recA中至少一个基因的失活。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的细菌宿主细胞，其还包含至少一个额外拷贝的gyrA基因。

15.一种试剂盒，其包含：

-根据权利要求1至14中任一项所述的细菌宿主细胞，所述宿主细胞包含至少2个染色体拷贝的编码相同的毒物蛋白的核酸序列，和

-载体，所述载体包含至少一个拷贝的编码解毒剂蛋白的核酸序列和至少一个拷贝的表达系统，其中所述表达系统插入有或能够插入有编码目的重组肽、多肽或蛋白质的核酸序列，

其中所述毒物蛋白是CcdB，所述解毒剂蛋白是CcdA。

16.根据权利要求15所述的试剂盒，其中编码目的重组肽、多肽或蛋白质的所述核酸序列在选自包括T7启动子、Ptrc、Para和Plac的组的启动子控制之下。