[发明专利]通过使抗体穿透细胞膜将具有完全免疫球蛋白形式的抗体定位在细胞质中的方法及其用途

权利要求书

1.通过渗透细胞膜将完整免疫球蛋白形式的抗体定位在细胞溶胶中的方法，其中所述抗体包含具有穿透所述细胞溶胶的能力的轻链可变区(VL)。

2.权利要求1的方法，其中所述抗体是嵌合、人或人源化抗体。

3.权利要求1的方法，其中所述抗体为选自以下的任何一种：IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。

4.权利要求1的方法，其中穿透所述细胞溶胶的能力包括通过胞吞作用穿透细胞且然后逃逸内体。

5.权利要求1的方法，其中所述轻链可变区包含：

含有与SEQ ID NO:4所述氨基酸序列具有至少90％同源性的氨基酸序列的CDR1；和

含有与选自SEQ ID NO:6和12的氨基酸序列具有至少90％同源性的氨基酸序列的CDR3。

6.权利要求1的方法，其中由轻链可变区的N末端开始的第2个和第4个氨基酸分别用亮氨酸(L)和甲硫氨酸(M)取代(其中所述氨基酸的位置根据Kabat编号系统进行编号)。

7.权利要求1的方法，其中由所述轻链可变区的N末端开始的第9个、第10个、第13个、第17个、第19个、第21个、第22个、第42个、第45个、第58个、第60个、第79个和第85个氨基酸分别用丝氨酸(S)、丝氨酸(S)、丙氨酸(A)、缬氨酸(V)、天冬氨酸(D)、缬氨酸(V)、异亮氨酸(I)、苏氨酸(T)、赖氨酸(K)、赖氨酸(K)、缬氨酸(V)、丝氨酸(S)、谷氨酰胺(Q)和苏氨酸(T)取代(其中所述氨基酸的位置根据Kabat编号系统进行编号)。

8.权利要求1的方法，其中由所述轻链可变区的N末端开始的第89个和第91个氨基酸分别用谷氨酰胺(Q)和酪氨酸(Y)取代(其中所述氨基酸的位置根据Kabat编号系统进行编号)。

9.权利要求1的方法，其中所述轻链可变区包含选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:1、2和3。

10.权利要求1的方法，其中所述抗体为主动穿透活细胞的抗体。

11.权利要求1的方法，其中所述抗体为靶向于细胞溶胶、细胞核、线粒体、内质网和/或细胞器大分子的抗体。

12.权利要求11的方法，其中所述细胞器大分子为蛋白、脂质、DNA或RNA。

13.权利要求12的方法，其中所述蛋白为与对细胞生长、细胞增殖、细胞周期、DNA修复、DNA完整性、转录、复制、翻译或细胞内转运的控制相关的蛋白。

14.权利要求12的方法，其中所述蛋白为用磷酸基、羧酸基、甲基、硫酸基、脂质、羟基或酰胺基进行修饰、活化或突变的蛋白。

15.权利要求1的方法，其中所述抗体为与所述细胞溶胶中活化的RAS特异性结合的抗体。

16.权利要求15的方法，其中所述抗体与所述细胞溶胶中活化的RAS的结合是经由与所述细胞溶胶中活化的RAS特异性结合的抗体的重链可变区。

17.权利要求15的方法，其中所述活化的RAS为突变的RAS。

18.权利要求16的方法，其中所述重链可变区包含：

含有与SEQ ID NO:14所述氨基酸序列具有至少90％同源性的氨基酸序列的CDR1；

含有与SEQ ID NO:15所述氨基酸序列具有至少90％同源性的氨基酸序列的CDR2；和

含有与SEQ ID NO:16所述氨基酸序列具有至少90％同源性的氨基酸序列的CDR3。

19.权利要求16的方法，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:13所述氨基酸序列。

20.一种轻链可变区(VL)，其诱导完整免疫球蛋白形式的抗体通过穿透细胞膜定位在细胞溶胶中。

21.权利要求20的轻链可变区(VL)，其中所述轻链可变区包含：

含有与SEQ ID NO:4所述氨基酸序列具有至少90％同源性的氨基酸序列的CDR1；和

含有与选自SEQ ID NO:6和12的氨基酸序列具有至少90％同源性的氨基酸序列的CDR3。