[发明专利]增强免疫细胞功能的方法和评估免疫细胞多功能性的方法

说明书

技术领域

本发明涉及增强免疫细胞功能的方法，涉及功能增强的免疫细胞，以及用于治疗和/或预防与免疫异常有关的疾病的药剂，所述药剂含有作为活性成分的功能增强的免疫细胞。本发明还涉及用于评估免疫细胞的多功能性的方法。

背景技术

T细胞作为免疫细胞，占外周血淋巴细胞的70～80％。T细胞分布在脾脏或遍及体内的淋巴结中，并有助于生物防御。T细胞分为细胞毒性T细胞(CD8⁺T细胞)和辅助性T细胞(CD4⁺T细胞)，其中细胞毒性T细胞直接影响病毒感染的细胞或癌细胞，辅助性T细胞(CD4⁺T细胞)辅助免疫活性细胞如细胞毒性T细胞的功能。T细胞具有在其表面上表达的T细胞受体(TCR)，并且通过这些TCR识别抗原。单一T细胞表达用于识别一种特定种类抗原的TCR。这被称为T细胞的抗原特异性。T细胞在各种免疫相关的临床病症中发挥重要作用，包括感染、肿瘤、器官移植和过敏。

近年来，已经阐明了免疫衰竭的机制，并且有报道指出，在癌症治疗中，抑制衰竭分子与配体的结合很重要。一些癌症患者具有显著较差的免疫应答(免疫衰竭)。免疫衰竭由以下引起：CD8⁺T细胞表达衰竭标记物如PD-1、Tim-3、Lag3等，并且这些衰竭标记物分子(衰竭分子)与其配体结合，这导致同时产生IL-2、TNFα和IFNγ(多功能性)的能力丧失，并且还导致经由细胞凋亡的细胞死亡(非专利文献1-6)。为了避免这种细胞凋亡和CD8⁺T细胞的免疫衰竭，有必要抑制衰竭分子本身的表达。然而，由于目前不存在这样的技术，抑制衰竭分子与配体的结合是恢复CD8⁺T细胞功能并阻止细胞凋亡的唯一方法。然而，衰竭分子的种类(数量)有增加的趋势，并且探寻适当数量的衰竭分子和被抑制免受结合的配体的研究仍在进行中。此外，由于该方法明显地具有副作用，所以期望具有较少副作用的方法。

为了监测疾病状态下的免疫状态或评估疫苗功效，对抗原特异性T细胞进行定量和定性测量作为免疫细胞多功能性的评估是重要的。对于进行免疫疗法如癌症疫苗疗法的患者，需要在体外对移出的细胞进行1或2周的抗原刺激以便判断治疗效果。T细胞功能测量方法的实例包括：细胞毒性测试，用于检测细胞因子产生的ELISA方法，通过荧光珠免疫测定检测分泌自整个细胞组的分子的方法，通过使用流式细胞仪(FCM，FACS)技术进行的细胞内细胞因子分析(细胞内细胞因子染色测定：ICS方法)，以及通过ELISPOT(酶联免疫斑点)法以单个细胞为基础检测分子分泌的方法。

尽管先前已知的用于测量T细胞功能的技术能够精确分析单个T细胞功能，但是分析结果不一定与预后相关。更具体地，难以确定健康对象或患有例如难治性感染或癌症的患者的免疫动力学，并且难以预测通过免疫激活剂进行的治疗的预后。在先前已知的用于增加T细胞功能的技术中，显著地增加患有例如难治性感染或癌症的患者或者健康对象的获得性免疫并从而治愈该症状存在局限性。首先，用于精确地验证或预测治疗效果的免疫动力学评估的条件不够好，并且不存在可用于全面判断并评估用于增加多种T细胞功能的方法和技术(评估免疫细胞多功能性的方法涉及治疗预后)的方法。

例如，在施用疫苗中，几乎总是需要施用佐剂以及抗原，但佐剂可引起严重的副作用。迄今为止，还没有发现安全、有效并可用于所有疫苗的佐剂。此外，在感染或癌症的许多情况下，通过施用疫苗不能获得足够的保护性免疫，尽管外周血中针对疫苗的CD8阳性杀伤T细胞有所增加。这种疫苗应用中的失败，通常可能是由于免疫衰竭。基于这种观点，至今没有全面的免疫动力学评估技术和T细胞功能增加剂，或者通过消除各种免疫细胞的免疫衰竭的细胞多功能性增加方法和精确且便利地预测和评估所产生的效果的方法的组合技术的方法。

专利文献1公开了二甲双胍用于增强化疗药物的效果，但是专利文献1的实施例公开了二甲双胍本身不具有肿瘤治疗效果。非专利文献7公开了二甲双胍作为II型糖尿病治疗剂的作用机制。

引用列表

专利文献

专利文献1：JP2013-503171 A

非专利文献

非专利文献1：Proc Natl Acad Sci USA.2002；99:12293-7

非专利文献2：Cancer Res.2004；64:1140-5

非专利文献3：J Exp Med.2010；207:2187-94

非专利文献4：Trends Immunol.2011；32:345-9