[发明专利]含有减毒睡眠嗜组织菌的免疫组合物

说明书

本公开提供了减毒睡眠嗜组织菌株、包含其的组合物以及其产生和使用的方法。减毒株相对于对应的致病菌可表达较低水平或无水平的各种毒力相关基因。有利地，可口服、鼻内、气管内或皮下施用减毒睡眠嗜组织菌株。

通过引用并入

本申请要求2014年3月25日提交的美国临时申请USSN 61/970,195 的优先权，并且所述临时申请通过引用整体并入本文。本文中引用的所 有其它参考文献也通过引用整体并入本文。

关于序列表的申明

以文本格式替代纸质拷贝提供与本申请相关的序列表，并且将所述 序列表在此通过引用并入本说明书。含有序列表的文本文件的名称为 MER_13_225P_ST25。该文本文件为17,356KB；其创建于2014年2月 20日；并在提交本说明书的同时将其通过EFS-Web电子提交。

发明领域

本发明总的来说涉及经遗传工程化的减毒细菌疫苗，特别地为牛类 提供免受由睡眠嗜组织菌(Histophilus somni)(以前称为睡眠嗜血杆菌 (Haemophilus somnus))引起的感染/疾病的广泛、安全和有效的保护的那 些疫苗。本发明还涉及产生该减毒细菌的方法，以及与该减毒细菌的减 弱的致病性相关的核酸变异的鉴定。

本发明因而涉及包含本发明的细菌(例如活的减毒细菌)的免疫原性 或疫苗组合物。也可在组合物中灭活细菌；但可有利的是，所述细菌是 活的减毒睡眠嗜组织菌。本发明因此还涉及用于制备和/或配制此类组合 物的方法；例如，在合适的培养基上或中培养或生长或繁殖所述细菌， 收获所述细菌，任选灭活所述细菌，以及任选将其与合适的兽医学上或 药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂或媒介物和/或佐剂和/或稳定剂混 合。因此，本发明还涉及细菌在配制此类组合物中的用途。

发明背景

牛呼吸道疾病综合征(BRDC)由多种微生物病原体组成，并对养牛业 造成重大经济损失。据估计治疗成本(包括预防接种疫苗和暴发后药物治 疗)将近每年40亿美元(Griffin,1997)。造成经济影响的还有在诊断为 BRDC的动物中所观察到的性能相关损失；平均日增重、收获时的体重 以及牛肉质量等级的可测量的损失(Babcock,2010)。关于与性能降低相 关的具体货币损失的报道不一；可能是由于对BRDC的不同情况下的定 义，但据估计在每只动物$40(Fulton,2002)与几乎$300(Duff和Gaylean 2011)之间。还已显示性能损失随动物需要BRDC治疗的次数增加而显著 增加(Fulton,2002)。

睡眠嗜组织菌(以前称为睡眠嗜血杆菌)已被鉴定为BRDC的关键影 响因素(Duff和Gaylean 2011)。属于巴氏杆菌(Pasterellacea)科的该革兰 阴性多形球杆菌(pleomorphic coccobacillus)(Korczak,2004)构成牛、羊和 其它反刍动物中的上呼吸道和泌尿生殖道的正常菌群的一部分(Ward, 2006)。它与其它牛病原体包括多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)和 溶血曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica)(这两者也与BRDC相关联)，以 及人病原体杜克雷嗜血杆菌(Haemophilus ducreyi)和流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)密切相关(Challacombe,2007)。

从健康小牛的上呼吸道睡眠嗜组织菌的分离率估计高达无疾病临床 表现的50％；然而诊断为BRDC的动物对于所述细菌具有甚至更高的分 离率(Griffin,2010)。在应激条件或免疫抑制状态下，睡眠嗜组织菌可定 殖在下呼吸道、心内膜或中枢神经系统，并且已被鉴定为多种疾病，诸 如肺炎、心内膜炎、关节炎、流产、败血症和血栓栓塞性脑膜脑炎(TEME) 的病原体(Ward,2006)。