[实用新型]联合检测结核分枝杆菌抗体的试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型是涉及生物应用技术领域，特别是涉及一种联合检测结核分枝杆菌抗体的试剂盒。

背景技术

结核分枝杆菌是引起结核病的病源菌，可侵犯全身各器官，但以肺结核为最多见。结核病至今仍为重要的传染病。估计世界人口中1/3感染结核分枝杆菌。据WHO报道，每年约有800万新病例发生，至少有300万人死于该病。我国建国前死亡率达200-300人/10万，居各种疾病死亡原因之首，建国后人民生活水平提高，卫生状态改善，特别是开展了群防群治，儿童普遍接种卡介苗，结核病的发病率和死亡率大为降低。因此及时诊断和治疗结核病，对于控制其发展和阻断其传播均有重要意义。

目前诊断结核病的实验室方法很多，对结核分枝杆菌的检测的主要方法是痰结核菌常规培养法，是结核病检测的金标准。而结核分枝杆菌特异性抗体免疫学检测方法主要包括ELISA和胶体金法。同时检测结核分枝杆菌IgM和IgG两种抗体有利于对被检对象进行全面的判定，有利于结核病的辅助诊断，有利于结核病的防控。在胶体金的检测方法中，大多数是检测结核分枝杆菌（TB）IgG的报道，也有同时检测结核分枝杆菌（TB）IgM和IgG抗体的检测试纸相关报道，但均未能实现结核分枝杆菌的east-6+LAM+38KDa+16kDa特异性重组抗原的标记，会出现漏检的问题。

本实用新型联合检测结核分枝杆菌抗体试剂盒，突破了传统技术难点，引入了生物素和链霉亲和素反应系统，将鼠源的特异性重组抗原east-6+LAM+38KDa+16kDa与活化的生物素BHZ偶联，将链霉亲和素与胶体金制备成链霉亲和素-胶体金复合物，然后将二者根据一定比例混合偶联后固相到玻璃纤维素膜上，实现结核分枝杆菌特异性抗原的标记和信号的放大，在NC膜第一检测线和第二检测线上分别包被鼠抗人IgM、鼠抗人IgG抗体，质控线上包被羊抗鼠IgG抗体，当样本中有结核分枝杆菌抗体IgM或者IgG时，首先被与生物素BHZ结合的结核分枝杆菌的重组抗原结合，形成复合物，通过侧向层析作用与第一检测线或者第二检测线上的鼠抗人IgG或者鼠抗人IgM抗体结合而显色，呈现阳性反应，否则呈现阴性反应。 同时由于一个链霉亲和素可以跟多个生物素结合，即一个“生物素-特异性重组抗原-结核分枝杆菌抗体”可以和多个亲和素标记的胶体金结合，起到了信号放大作用，提高了产品的灵敏度，大大降低了漏检率。

生物素-链霉亲和素系统是一种新型的生物反应放大系统，此技术利用生物素和链霉亲和素均可偶联抗原、抗体等生物大分子，同时也可偶联酶、荧光素、胶体金、乳胶等示踪物质，同时生物素、亲和素之间具有高度亲和力和放大作用的特点，能够在免疫反应中起到信号放大作用，能够提高反应的灵敏度和特异性而被广泛应用于检测产品的试剂盒开发。

发明内容

本实用新型的目的是提供一种联合检测结核分枝杆菌抗体的试剂盒，具有敏感性高、特异性强、操作简便、反应快速和经济实用等优点。

本实用新型提供一种联合检测结核分枝杆菌抗体的试剂盒，其特征在于这种方法的试剂盒的组成，上样垫(1) 的一端紧密压接含有“特异性重组抗原east-6+LAM+38KDa+16kDa的生物素-链霉亲和素-胶体金”的复合物偶联垫(2)，复合物偶联垫(2)另一端紧密压接硝酸纤维素(NC)膜(3)，硝酸纤维素膜包被有相互分离的检测线T1 (5)、检测线T2(6)和质控(C)线，检测线T1 (5) 为包被在NC膜上的抗人IgM抗体，检测线T2(6) 为包被在NC膜上的抗人IgG抗体，质控(C)线(7)为包被在NC膜上的羊抗鼠IgG抗体，硝酸纤维素膜的另一端连接吸样垫(4) 形成试纸。

所述的一种联合检测结核分枝杆菌抗体的试剂盒，其特征在于生物素-链霉亲和素对检测信号的放大作用，将鼠源的特异性重组抗原east-6+LAM+38KDa+16kDa与活化的生物素BHZ偶联，将链霉亲和素与胶体金制备成链霉亲和素-胶体金复合物，然后将二者根据一定比例混合偶联后固相到玻璃纤维素膜上，实现结核分枝杆菌特异性抗原的标记信号的放大。

所述的一种联合检测结核分枝杆菌抗体的试剂盒，其特征在于所述的重组抗原，结核分枝杆菌特异性的抗原主要包括east-6、LAM、38KDa、16kDa 4种，其特征在于这些抗原的特异性基因片段重组联合形成结合分枝杆菌的east-6+LAM+38KDa+16kDa重组抗原，能够提高结核病检测检测结果的准确性。重组抗原可以利用基因工程重组表达或在培养病毒中纯化。