[发明专利]基于硫黄素T染料设计的无标记荧光探针检测碘离子的方法

权利要求书

1.基于硫黄素T染料设计的无标记荧光探针检测碘离子的方法，其特征在于，所述基于硫 黄素T染料设计的无标记荧光探针与碘离子发生作用，破坏DNA序列的发夹结构，使荧光 减弱，实现对碘离子的定量检测。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)向所述硫黄素T/DNA/Hg²⁺无标记荧光探针加入缓冲溶液；

(2)在步骤(1)得到的反应液中加入碘离子溶液进行反应，测量混合液的荧光值，建 立方程检测待测液中的碘离子溶度，所述反应温度为10～38℃，反应时间为1～10分钟。

3.如权利要求1～2任一项所述的方法，其特征在于，所述基于硫黄素T染料设计的无标记 荧光探针是硫黄素T/DNA/Hg²⁺无标记荧光探针。

4.如权利要求1～2任一项所述的方法，其特征在于，所述硫黄素T/DNA/Hg²⁺无标记荧光探 针是通过如下方法得到的：以硫黄素T染料、DNA序列、汞离子为反应物，采用“一锅法- 混合”方法，加入终浓度为0.1～10μM的硫黄素染料溶液、终浓度为0.2～20μM的合成的 DNA溶液和终浓度为1.5～150μM的汞离子溶液，振荡1～10分钟，然后稳定1～10分钟， 得到所述硫黄素T/DNA/Hg²⁺无标记荧光探针溶液。

5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述缓冲溶液为磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓 冲溶液浓度为5～20mM。

6.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述缓冲溶液的pH值为6～8。

7.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)，利用荧光光谱仪扫描混合溶液 的荧光发射光谱，以荧光强度变化值为纵坐标，碘离子的浓度为横坐标，绘制工作曲线，得 到一元一次方程；取待检液，加入等体积的检测液，混合溶液反应后，扫描混合溶液的荧光 发射光谱获取荧光强度变化值，代入所述一元一次方程，得到碘离子的浓度，其中，所述方 法在490nm处测定。

8.一种基于硫黄素T染料设计的无标记荧光探针，其特征在于，所述基于硫黄素T染料设 计的无标记荧光探针是硫黄素T/DNA/Hg²⁺无标记荧光探针，用于检测碘离子。

9.如权利要求8所述的基于硫黄素T染料设计的无标记荧光探针的制备方法，其特征在于， 采用“一锅法-混合”制得，所述“一锅法-混合”包括以下步骤：以硫黄素T染料、DNA序 列、汞离子为反应物，采用“一锅法-混合”方法，加入终浓度为0.1～10μM的硫黄素染料 溶液、终浓度为0.2～20μM的合成的DNA溶液和终浓度为1.5～150μM的汞离子溶液，振 荡1～10分钟，然后稳定1～10分钟，得到所述硫黄素T/DNA/Hg²⁺无标记荧光探针溶液。

10.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求8所述的基于硫黄素T染料设计 的无标记荧光探针，所述试剂盒用于检测碘离子。

11.一种试剂盒，其特征在于，其包括试剂1：浓度为1～100μM的硫黄素染料溶液；试剂2： 浓度为2～200μM的合成的DNA溶液；试剂3：浓度为15～1500μM的汞离子溶液；试剂4： 浓度为5～20mM的磷酸盐缓冲溶液；试剂5：纯水；其中，所述试剂1、试剂2、试剂3、 试剂4、试剂5的体积比为1:1:1:5:1。

12.一种测定系统，其特征在于，所述系统包括如权利要求10所述的检测试剂盒、多功能酶 标仪、透明微孔板、荧光光谱仪、比色皿，所述系统用于检测碘离子。

13.如权利要求8所述的基于硫黄素T染料设计的无标记荧光探针、如权利要求10-11之任 一项所述的检测试剂盒，或如权利要求12所述的测定系统在检测碘离子中的应用。