[发明专利]hTERT基因反义寡核苷酸、药物组合物及应用

说明书

技术领域

本发明提供了一种hTERT基因反义寡核苷酸、药物组合物及应用，特别是涉及一种hTERT基因全硫代修饰的反义寡核苷酸、包含有藏药镰状棘豆总黄体酮（TFOF）的药物组合物，以及它们在用于制备治疗氟它胺耐受型前列腺癌药物中的应用，属于基因药物技术领域。

背景技术

前列腺癌是男性泌尿系最常发生的肿瘤之一，在美国其发病率在肿瘤患者中占第一位，死亡率占第二位。研究表明，前列腺癌细胞属于雄激素依赖性细胞，通过抑制人体雄激素的产生，前列腺癌细胞生长速度变缓，出现惰性生长的现象，甚至出现前列腺癌转移灶萎缩的情况，治疗效果良好。随着抗雄药物的治疗，前列腺癌细胞会由雄激素依赖性转化为雄激素非依赖型，抗雄药物治疗会逐渐失去作用。雄激素非依赖型前列腺癌的治疗是临床上最棘手的问题之一。最新研究表明，雄激素可以调节前列腺癌细胞的端粒酶活性。现已证明hTERT基因mRNA与端粒酶活性表达一致，其上游表达对端粒酶活性表达起重要作用，被认为是端粒酶活性表达的限速因子。雄激素阻断会导致前列腺癌细胞端粒酶限速因子hTERT基因的表达活性受到抑制伴有癌细胞端粒酶活性的降低，因此使用端粒酶抑制剂替代雄激素可以降低雄激素非依赖型前列腺癌端粒酶的活性。人类端粒酶主要在雄激素非依赖型前列腺癌中表达，而在正常组织及良性肿瘤中不表达，表明端粒酶激活与该疾病发生过程关系密切。

镰状棘豆为豆科棘豆属（oxytropisD.C.）植物镰状棘豆（O.falcataBunge）的干燥全草，是一味重要的藏药。镰状棘豆味辛、性寒，有小毒，具有清热解毒，生肌愈疮，抗炎镇痛，涩脉止血等功效。在藏药中有“草药之王”的美誉。镰状棘豆主要含有黄酮，生物碱，皂苷类等成分，药理研究表明，具有镇痛，抗炎，抗氧化，抗肿瘤等活性。有实验研究藏药镰状棘豆总黄酮(TFOF)对肝癌细胞SMMC-7721凋亡作用的影响。

反义技术的基本原理就是根据碱基互补原则，用人工合成或生物体表达的特定互补的DNA或RNA片段(反义核酸)以抑制或封闭专一靶基因表达的技术，有理由发展成为一种新的基因治疗药物。

发明内容

本发明提供了一种hTERT基因全硫代修饰反义寡核苷酸（ASPS-ODN），其可以对氟它胺耐受型前列腺癌细胞LNCaP端粒酶活性产生影响，另外，本发明还提供一种药物组合物，反义寡核苷酸与镰状棘豆总黄酮(TFOF)，ASPS-ODN对端粒酶活性抑制作用可以对TFOF诱导氟它胺耐受型(雄激素非依赖型)前列腺癌细胞LNCaP凋亡产生增敏作用。

根据本发明的第一个方面：

一种前列腺癌细胞hTERT基因反义寡核苷酸，其核苷酸序列为：5^，-GGAGCGCGCGGCATCGCGGG-3^，。

所述的反义寡核苷酸上的所有碱基是经过硫代修饰的。

根据本发明的第二个方面：

一种用于治疗氟它胺耐受型前列腺癌的组合物，包括有权利要求1所述的反义寡核苷酸，以及镰状棘豆总黄酮（TFOF）。

根据本发明的第三个方面：

包含有上述组合物的药物，所述的药物是以水为载体，其中反义寡核苷酸的浓度是5～20μmol/L，镰状棘豆总黄酮的浓度是0.05～0.2g/L。

根据本发明的第三个方面：

上述的反义寡核苷酸在制备治疗氟它胺耐受型前列腺癌药物中的应用。

根据本发明的第四个方面：

上述的组合物在制备治疗氟它胺耐受型前列腺癌药物中的应用。

有益效果：hTERT基因反义核酸对TFOF诱导的氟它胺耐受型前列腺癌细胞LNCaP-flu凋亡有增敏作用。

附图说明

图1hTERT基因反义核酸与0.1g/LTFOF联合作用48h对LNCaP-flu细胞活力的影响。

图2空白样本的流式细胞仪检测散点图。

图3SPS-ODN样本的流式细胞仪检测散点图。

图4ASPS-ODN样本的流式细胞仪检测散点图。

图5TFOF样本的流式细胞仪检测散点图。

图6TFOF+SPS-ODN样本的流式细胞仪检测散点图。

图7TFOF+ASPS-ODN样本的流式细胞仪检测散点图。

图8hTERT反义核酸与TFOF0.1g/L联合作用48h，LNCaP-flu细胞凋亡百分率（A:空白;B:SPS-ODN;C:ASPS-ODN;D:TFOF;E:TFOF+SPS-ODN;F:TFOF+ASPS-ODN）。