[发明专利]基于IL-12稳定膜表达的肿瘤治疗剂及其制法和用途

说明书

本发明提供了基于IL‑12稳定膜表达的肿瘤治疗剂及其制法和用途。具体地，本发明提供了一种IL‑12/突变型CD62L融合蛋白。在本发明中，通过利用含IL‑12/突变型CD62L融合基因的慢病毒修饰抗肿瘤T细胞。实验表明，本发明的融合蛋白可在T细胞的膜表面稳定表达,不依赖于抗肿瘤T细胞识别肿瘤时所伴随的野生型CD62L的切割。此外，膜表达本发明融合蛋白的T细胞一方面保持了高活力并有效地杀灭肿瘤细胞，另一方面具有显著降低的毒副作用和显著提高的安全性。

技术领域

本发明涉及医药领域，具体地涉及一种基于IL-12稳定膜表达的高效低毒的肿瘤治疗剂及其制法和用途。

背景技术

IL-12是一种非常重要的免疫刺激因子。IL-12是由共价键链接的异质性二聚体细胞因子，由p35和p40亚基组成，在体内由激活的免疫细胞分泌。IL-12是重要的细胞免疫调控因子，在抗感染免疫及恶性肿瘤的免疫中通过NK细胞以及CTL发挥作用。

虽然IL-12具有显著的抑瘤效果，但是由于其系统性全身给药会引起全身性毒副反应，因而受到极大的限制。在本发明之前，IL-12的临床应用由于其所诱导的全身性毒副作用，以及早期临床试验通过全身系统性给药引起的两例患者的意外死亡，使其临床应用受到大大的限制。

为了避免全身性给药的毒副作用从而实现临床应用的目的，临床科研工作者们通过肿瘤局部注射、瞬时表达及多点注射等途径应用于肿瘤的临床试验，但是由于IL-12的治疗效果同回输的IL-12的剂量直接相关，上述局部的临床方案并未有取得显著的抑瘤效果。

为了解决这一问题，本发明人曾经试图通过基因修饰抗肿瘤T细胞持续分泌IL-12来实现抗肿瘤效果的最大化，但是由于未知的原因(一种可能的原因是IL-12的毒副作用)通过持续分泌IL-12方案基因修饰的T细胞在体外不能有效扩增，并引起大量的T细胞凋亡。

综上所述，本领域尚缺乏高效且低毒副作用的基于IL-12的抗肿瘤药物。因此，本领域迫切需要开发高效且低毒副作用的肿瘤治疗药物。

发明内容

本发明的目的就是提供了一种高效且毒副作用低的肿瘤治疗药物及其制法和应用。

在本发明的第一方面，提供了一种融合蛋白，所述融合蛋白包括融合在一起的以下元件：

(i)任选的位于N端的信号肽和/或前导肽；

(ii)第一蛋白元件；

(iii)第二蛋白元件；以及

(iv)任选的位于第一蛋白元件和第二蛋白元件之间的连接肽元件；

其中，所述信号肽可操作地连于由(ii)、(iii)和(iv)所构成的融合元件；

并且第一蛋白元件为IL-12蛋白元件；第二蛋白元件为突变型CD62L的蛋白元件，所述突变型CD62L的蛋白元件缺失了ADAM17的切割位点。

在另一优选例中，所述的融合蛋白具有选自下组的结构：

(1)式Ia所述结构：

D-A-B (Ia)，或

(2)式Ⅱa所述结构：

D-A-C-B (Ⅱa)，

其中，

A为IL-12蛋白元件；

B为突变型CD62L蛋白元件；

C为任选的连接肽元件；

D为任选的信号肽信号肽和/或前导肽序列；

各“-”独立地表示连接上述元件的肽键或肽接头。