[发明专利]一种类贝壳珍珠层重组蛋白CSCa及其调控制备碳酸钙的方法有效
| 申请号: | 201510923271.9 | 申请日: | 2015-12-11 |
| 公开(公告)号: | CN105440140B | 公开(公告)日: | 2019-07-12 |
| 发明(设计)人: | 傅正义;万亚敏;谢浩;王小莉 | 申请(专利权)人: | 武汉理工大学 |
| 主分类号: | C07K19/00 | 分类号: | C07K19/00;C12N15/62;C01F11/18 |
| 代理公司: | 湖北武汉永嘉专利代理有限公司 42102 | 代理人: | 唐万荣;徐晓琴 |
| 地址: | 430070 湖*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 种类 贝壳 珍珠 重组 蛋白 csca 及其 调控 制备 碳酸钙 方法 | ||
1.一种类贝壳珍珠层重组蛋白CSCa,其特征在于,所述重组蛋白CSCa是由几丁质结合区域-蚕丝蛋白重复序列-钙离子结合区域依次组成,所述几丁质结合区域的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示;所述蚕丝蛋白重复序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示;所述钙离子结合区域的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
2.编码上述类贝壳珍珠层重组蛋白CSCa的基因,其特征在于,由几丁质结合区域-蚕丝蛋白重复序列-钙离子结合区域依次组成,所述几丁质结合区域的碱基序列如SEQ ID NO.4所示;所述蚕丝蛋白重复序列的碱基序列如SEQ ID NO.5所示;所述钙离子结合区域的碱基序列如SEQ ID NO.6所示。
3.权利要求1~2任一所述类贝壳珍珠层重组蛋白CSCa调控制备碳酸钙的方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)重组蛋白CSCa的制备:构建含有几丁质结合区域、蚕丝蛋白重复序列和钙离子结合区域的重组质粒PTWIN1-CSCa,将重组质粒PTWIN1-CSCa转化到感受态细胞中,扩大培养菌体并诱导其表达重组蛋白CSCa;收集菌体,高压破碎后取上清,上清经过柱、洗杂、洗脱、透析处理后,获得纯化的重组蛋白CSCa溶液;
(2)将几丁质与重组蛋白CSCa溶液混合均匀,待几丁质与重组蛋白CSCa充分结合后,向混合溶液中加入NaHCO3溶液,均匀搅拌后调节pH,再加入CaCl2▪2H2O溶液,搅拌条件下进行矿化反应,反应结束后,静置取沉淀,沉淀经水洗、冷冻干燥后即为碳酸钙矿化物;所述矿化反应的反应体系中HCO3-和Ca2+的摩尔比为1:1;离子浓度为10mmol/L~20mmol/L;所述矿化反应的反应体系中重组蛋白CSCa的质量体积浓度为5mg/L~30mg/L;所述pH为8~9.5。
4.根据权利要求3所述的类贝壳珍珠层重组蛋白CSCa调控制备碳酸钙的方法,其特征在于,所述几丁质与重组蛋白CSCa的质量比为2500:1~5000:1。
5.根据权利要求3所述的类贝壳珍珠层重组蛋白CSCa调控制备碳酸钙的方法,其特征在于,所述矿化反应的反应时间为30min~60min。
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