[发明专利]一种分离富集叶绿酸钠的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种分离富集叶绿酸钠的方法，尤其涉及一种双水相气浮溶剂浮选竹叶皂化液中叶绿酸钠的方法，属于天然产物萃取分离技术领域。

背景技术

叶绿素是一种天然绿色色素，广泛存在于自然界的绿色植物和藻类中。但是叶绿素极不稳定，遇到酸、碱、光、热和酶等都易分解，并且叶绿素很难溶于水，所以其应用受到很大限制。叶绿素铜钠盐是叶绿素的合成衍生物，水溶性好且很稳定，被广泛用作食品添加剂、化妆品添加剂和着色剂等。由于叶绿素铜钠盐具有较高的价值，所以对叶绿素的开发利用主要是将叶绿素制成叶绿素铜钠盐来使用。因此，叶绿素铜钠盐的制备方法受到国内外广泛的关注。

传统制备叶绿素铜钠盐的工艺过程主要是：有机溶剂浸提浓缩得到糊状叶绿素，将糊状叶绿素皂化制备叶绿酸钠，酸化置铜得到叶绿素铜酸粗品，碱代成盐并除杂得到最终产物叶绿素铜钠盐。在这一系列工艺过程中，叶绿酸钠是制备叶绿素铜钠盐的重要中间体，其纯度直接影响叶绿素铜钠盐的收率和产品质量。传统工艺在制备叶绿酸钠时，不仅要消耗大量有机溶剂和能源，而且由于有机溶剂浸提过程中水溶性和脂溶性杂质也连同叶绿素被萃取出来，导致皂化得到的叶绿酸钠也掺杂大量杂质，纯度很低。因此，要提高产品叶绿素铜钠盐的产率和质量，需要建立一种高效、绿色无污染的提取、分离和富集叶绿酸钠的方法。

常用的物质萃取分离方法主要有溶剂萃取、双水相萃取及溶剂浮选法等。而当使用溶剂萃取时，需要消耗大量有机溶剂，并且在一些极具价值的生物活性物质的提取分离中，溶剂萃取会导致生物活性物质的变形和失活。双水相萃取操作条件温和，工艺简单，能够解决溶剂萃取对生物活性物质破坏的问题，但双水相萃取对目标物的富集倍数较低。溶剂浮选虽然能解决目标物富集倍数受限于相比的缺点，但常常会使用一些有毒有机溶剂，造成环境污染和威胁人类健康。

双水相气浮溶剂浮选是近年来出现的一种极具前途的新型预富集和分离技术，它集溶剂浮选技术和双水相萃取技术于一体，将二者的优势互补，具有很多优点，包括分离效率高、富集倍数大、操作条件温和、操作过程简单和有机溶剂消耗量小等。而且双水相气浮溶剂浮选可以按比例放大试验参数，非常适用于工业生产。尤其是采用小分子醇—无机盐双水相气浮溶剂浮选法，不仅同时具有绿色环保、成本低和相组成成分易于回收的优点，而且能够有效地将目标物质从混合物中分离出来，富集倍数大。因此，该小分子醇—无机盐双水相气浮溶剂浮选法在天然产物的分离富集领域具有广泛的应用前景。

发明内容

本发明的目的在于克服叶绿素铜钠盐中间体叶绿酸钠提取分离过程中工艺复杂、能耗高、纯度低的缺陷，提供一种操作简单、低成本、绿色环保且高效的乙醇—磷酸三钾双水相气浮溶剂浮选的方法来分离/富集竹叶皂化液中的叶绿酸钠。

为达到以上技术目的，本发明采用如下技术手段：

一种分离富集叶绿酸钠的方法，所述方法是将双水相体系和气浮溶剂浮相结合，选竹叶皂化液中叶绿酸钠的方法，按照下述步骤进行：

（1）采集新鲜竹叶并进行预处理得到竹叶皂化液，置于4℃冰箱中保存，每5天重新制备一次储备液；

（2）将一定浓度的磷酸三钾溶液和竹叶皂化液混合于比色管中，震荡混合均匀后转移至浮选柱中，然后从柱顶端加入一定体积的乙醇，通入氮气进行浮选；

（3）浮选结束后，用滴管移取出上相乙醇相，下相从浮选柱底部开关流出，用紫外-可见分光光度法测量上下相叶绿酸钠和上相糖的吸光度，从而得出叶绿酸钠的回收率及糖的去除率；

（4）将上相乙醇和下相磷酸三钾回收用于建立二次浮选；

其中，步骤（2）中所述的磷酸三钾溶液浓度为0.46-0.62g/mL；

所述磷酸三钾溶液与竹叶皂化液的体积比为45:5；

所述乙醇体积为4-5.5mL；所述氮气流速为10-30mL/min；所述浮选时间为15-35min。

本发明的有益效果如下：

（1）本发明采用双水相气浮溶剂浮选法，将双水相体系和溶剂浮选相结合，既解决了双水相体系中目标物富集倍数受限于相比的缺点，又避免了溶剂浮选常常会使用一些有毒有机溶剂的缺陷。

（2）本发明首次采用双水相气浮溶剂浮选法浮选叶绿酸钠。叶绿酸钠分子具有非常好的表面活性，能够大量吸附在气泡表面浮选至有机溶剂相。因此，叶绿酸钠较其他物质非常适用于双水相气浮溶剂浮选。