[发明专利]从三棱中提取抗肿瘤活性组分的方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及中药提取技术领域，具体涉及一种从三棱中提取抗肿瘤活性组分的方法，以及该活性组分在制备抗肝癌、抗肺癌药物中的应用。

背景技术

三棱为黑三棱科植物黑三棱(Sparganiumstolonierum,Buch.-Ham)的干燥块茎，其味苦、性平、入肝、脾经，具有破血行气、消积止痛等功效。目前三棱一般整个或切片炮制入药，缺乏必要的药效物质基础和药效研究，缺乏合理的质量控制标准，难以确保临床用药的有效性、安全性、可持续性。可见，对三棱的化学成分进行进一步提取和研究非常有必要。

发明内容

本发明针对以上现有技术，采用高效液相色谱技术，从三棱中提取得到具备抗肝癌和抗肺癌活性的活性组分，且该分离方法稳定，重复性高，制备量大，适用于大规模工业化生产需要。

本发明所采用的技术方案为：

一种从三棱中提取抗肿瘤活性组分的方法，该方法包括以下步骤：

(1)超低温粉碎：取干燥的三棱为原料，进行超微粉碎5～20min，得到超微粉；

(2)乙酸乙酯提取：在超微粉中加入乙酸乙酯，乙酸乙酯的加入体积(L)为超微粉质量(Kg)的8～10倍，70～75℃加热1～3小时进行提取，离心取沉淀重复1～3次，合并提取的上清并浓缩干燥，为粗提组分；

(3)色谱分离：

(a)一维分离：取粗提组分用40％乙醇-正己烷溶液(乙醇与正己烷按体积比4︰6配比而成，下同理)20～60℃超声溶解至浓度为60～100mg/ml，过膜后通过高压制备液相色谱进行分离，采用的色谱柱为Silica正相硅胶色谱柱，采用A流动相为正己烷、B流动相为乙醇的二元流动相体系，进样量为100～150mL/针，流动相流速为550～600mL/min，洗脱方式为B相浓度由0％至30％(即0％乙醇-正己烷溶液至30％乙醇-正己烷溶液)梯度洗脱50-60min，检测波长为210～280nm，根据紫外吸收光谱收集10-17.5min洗脱液作为目的组分，经浓缩后真空冷冻干燥，得到一维液相组分；

(b)二维分离：取一维液相组分用40％乙醇-正己烷溶液20～60℃超声溶解至浓度为60～100mg/ml，过膜后通过高压制备液相色谱进行分离，采用的色谱柱为Silica正相硅胶色谱柱，采用A流动相为正己烷、B流动相为乙醇的二元流动相体系，进样量为1～4mL/针，流动相流速为12～16mL/min，洗脱方式为B相浓度5％(即5％乙醇-正己烷溶液)等度洗脱25-30min，检测波长为210～280nm，根据紫外吸收光谱收集24.3-26min洗脱液作为目的组分，经浓缩后真空冷冻干燥，得到本发明抗肿瘤活性组分。

作为优选，所述步骤(1)中超微粉碎时间为12min。

作为优选，所述步骤(2)中乙酸乙酯提取的提取温度为72℃。

作为优选，所述步骤(2)中超微粉与乙酸乙酯的料液比为1︰8。

作为优选，所述步骤(3)(a)中粗提组分溶解于40％乙醇-正己烷溶液的浓度为80mg/ml。

作为优选，所述步骤(3)(a)一维分离中色谱柱的直径为150mm，柱长为250mm，其中硅球粒径为10μm，孔径为10nm。

作为优选，所述步骤(3)(b)二维分离中一维液相组分溶解于40％乙醇-正己烷溶液的浓度为80mg/ml。

作为优选，所述步骤(3)(b)二维分离中色谱柱的直径为20mm，柱长为250mm，其中硅球粒径为10μm，孔径为

本发明进一步提供上述提取得到的抗肿瘤活性组分在制备抗肺癌药物中的应用。该抗肿瘤活性组分作为有效成分，按常规方法如口服、注射，与药学上的可接受载体或赋形剂，制成适合口服、注射等给药方式的剂型，如：片剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂、丸剂、溶液剂、悬浮液、糖浆、口腔含片、舌下含片、注射剂、软膏剂、栓剂、吸入剂等多种剂型。

本发明还进一步提供上述提取得到的抗肿瘤活性组分在制备抗肝癌药物中的应用。该抗肿瘤活性组分作为有效成分，按常规方法如口服、注射，与药学上的可接受载体或赋形剂，制成适合口服、注射等给药方式的剂型，如：片剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂、丸剂、溶液剂、悬浮液、糖浆、口腔含片、舌下含片、注射剂、软膏剂、栓剂、吸入剂等多种剂型。

本发明原料三棱为黑三棱科植物黑三棱的干燥块茎，其化学成分复杂，所以本发明先选用乙酸乙酯进行有效组分的粗提，且乙酸乙酯为脂溶性溶剂，与其相似相溶的组分也应该具备进入生物活性细胞所必需的脂溶性特性，从而具有更高的进入细胞参与细胞内作用的可能性。