[发明专利]一种快速检测腈水解酶活性的方法

权利要求书

1.一种快速检测腈水解酶活性的方法，其特征在于：首先利用腈水解酶催化腈类化合物发生水解反应，水解产物经终止反应、稀释后，加入含有盐酸羟胺和二环己基碳二亚胺的乙醇溶液，震荡混均，水浴加热后加入三氯化铁的乙醇溶液，待充分反应后，用紫外分光光度计测定520nm处的吸光度值，根据吸光度值的大小可计算出腈水解酶活性的大小。

2.如权利要求1所述的一种快速检测腈水解酶活性的方法，其特征在于：所述的腈类化合物为扁桃腈、烟腈、苯甲腈、1-氰基-环己基乙腈或乙腈。

3.如权利要求1所述的一种快速检测腈水解酶活性的方法，其特征在于包括如下步骤：

1）一个利用腈水解酶催化水解腈类化合物的步骤；采用磷酸盐缓冲溶液重新悬浮静息细胞，然后加入底物腈，在摇床上转化反应；

2）将催化水解腈类化合物的样品进行处理的步骤；将步骤1）的反应样品用甲醇终止反应，离心，得上清，上清再用双蒸水稀释4~6倍，即为转化反应后的样品；

3）向步骤2）所得的反应样品中加入三倍体积的盐酸羟胺的乙醇溶液，所述的盐酸羟胺乙醇溶液的浓度为1～9mM，接着加入样品体积五分之一体积的DCC的乙醇溶液，DCC的乙醇溶液的浓度为0.2M；将该混合液震荡混匀，恒温加热，温度范围为20～80℃，加热10～40min，水浴完成后接着加入样品体积二十分之一体积的三氯化铁溶液的乙醇溶液，所述的三氯化铁溶液的乙醇溶液的浓度为0.1~1.0M，显色反应10min，用紫外分光光度计测定520nm处的吸光度值，根据吸光度值的大小可计算出腈水解酶活性的大小。

4.如权利要求3所述的一种快速检测腈水解酶活性的方法，其特征在于：所述的盐酸羟胺乙醇溶液的浓度为4mM。

5.如权利要求3所述的一种快速检测腈水解酶活性的方法，其特征在于：所述的恒温加热条件为60℃。

6.如权利要求3所述的一种快速检测腈水解酶活性的方法，其特征在于：所述的三氯化铁溶液的乙醇溶液的浓度为0.5M。