[发明专利]利用自身氮源的灰树花液体培养基及其制备方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种灰树花培养基，尤其涉及一种利用自身氮源的灰树花液体培养基，属于食用菌栽培领域。

【背景技术】

灰树花(Grifolafrondosa)是中国和日本的传统食药用菌，在北半球广有分布。其菌柄侧生、多分枝，菌盖扇形或匙形，重叠成簇，围聚成团，如花球状，在分类学界曾被归入牛肝菌属和多孔菌属，现被归入奇果菌属。灰树花子实体不但鲜嫩美味，经研究发现还具有免疫调节、抗肿瘤、抗辐射、降血糖、调节血脂、护肝、清除自由基、调节肠道运动和抗病毒等多种功效。其中被命名为D-fraction的灰树花蛋白多糖因具有显著的抗癌作用而备受关注，相关研究工作延续至今。

灰树花通过液体培养，能快速获得其含有活性物质的菌丝体，而且对菌丝体分泌到外界的胞外多糖等活性物质也更容易分离和回收，这是固体培养基所难以实现的。据文献报道，灰树花的胞外多糖具有抗氧化、抗肿瘤、抑制突变的功能，可见，灰树花液体培养技术是开发防治人体重大、慢性疾病产品的前置技术之一。

食药用菌液体培养基主要含有碳源物质、氮源物质和微量元素三类物质组成，碳源物质一般是单糖，较少采用二糖；氮源物质一般是蛋白胨、酵母浸出物等。这些营养物质的组合是参考细菌、酵母等微生物发酵技术而来，能满足食药用菌的一般生长需要，但针对性不强，没有根据灰树花本身的生长需求设计一个专属于灰树花的培养配方。

【发明内容】

针对上述技术问题，本发明利用灰树花子实体中的提取物为其菌丝体提供氮素类营养成分，提供一种优于传统培养配方的灰树花液体培养基。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种利用自身氮源的灰树花液体培养基，包括氮源营养物和葡萄糖，所述氮源营养物为灰树花子实体提取液。

优选的，所述灰树花子实体提取液由灰树花子实体和水混合，经水浴加热过滤后收集滤液制得。

优选的，上述利用自身氮源的灰树花液体培养基中，葡萄糖的浓度为10-20g/L，进一步优选为20g/L。

优选的，上述利用自身氮源的灰树花液体培养基pH为5.0-6.0，进一步优选为5.5。

本发明的另一目的是提供一种制备上述利用自身氮源的灰树花液体培养基的方法，具体包括以下步骤：

(1)制备灰树花子实体提取液：取灰树花子实体加入纯化水中，水浴加热提取1.5-3h后，过滤并弃去灰树花子实体残渣，在滤液中加入纯化水补足挥发体积，即得灰树花子实体提取液；

(2)加入碳源营养物：按照10-20g/L的比例往灰树花子实体提取液中加入无水葡萄糖；

(3)调节酸碱度：将步骤(2)得到的溶液pH调节至5.0-6.0，得到灰树花液体培养基。

优选的，所述步骤(1)中，灰树花子实体与纯化水的质量体积比为5-10％[质量(g)/体积(mL)]。

优选的，所述步骤(1)中，水浴温度为80℃，提取时间为2h。

进一步的，所述步骤(3)中，采用1N的盐酸溶液或1N的氢氧化钠溶液调节培养基的pH值。

通过上述方法制得灰树花液体培养基经灭菌后倒在平板即可使用，灭菌条件可选的采用121℃、0.1MPa大气压下灭菌20min。

和现有技术相比，本发明的有益效果在于：

本发明利用灰树花子实体中的提取物为其菌丝体提供氮素类营养成分，替代传统灰树花液体培养基中的蛋白胨、酵母浸出物等氮源物质，实验证明，该配方菌丝生长状态以及菌丝重量均优于传统的培养配方，且在一定程度上缓解了现有技术中灰树花长期生长在化学试剂培养基中导致退化的问题；本发明所述培养基中的灰树花子实体提取液的提取过程简单易操作，制得的培养基效果突出，有利用该培养基的推广使用。

【附图说明】

图1：试验组1中的菌丝球生长状态；

图2：试验组2中的菌丝球生长状态；

图3：试验组3中的菌丝球生长状态；

图4：试验组4中的菌丝球生长状态；

图5：对照组中的菌丝球生长状态。

【具体实施方式】

以下结合实施例来进一步解释本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。

实施例1

本实施例按照以下方法制得利用自身氮源的灰树花液体培养基：