[发明专利]人血白蛋白优势抗原表位的筛选及应用

说明书

本发明公开了本发明提供的人血白蛋白(HSA)优势抗原表位及与猪、马、牛、羊白蛋白差异性抗原表位，还公开了抗原在制备人血白蛋白检测试剂中的应用。本发明采用生物信息学技术对人、猪、马、牛、羊白蛋白序列进行分析，筛选出三个抗原区段进行克隆表达，其中有一个抗原区段具有较高的差异，能与HSA抗体反应且与人、猪、马、牛、羊白蛋白抗体无交叉反应，可用于人血白蛋白鉴别诊断。

技术领域

本发明涉及人血白蛋白的抗原表位，还涉及其在人血白蛋白特异性检测中的应用。

背景技术

血液制品是当前医疗行业使用广泛且用量逐年增加的一类药品，随着医疗保障体系的不断完善和人们对疾病治疗意识的提高，临床中的非保守性手术治疗方式越来越普遍，从而推动了血液制品市场的发展。人血白蛋白(HSA)作为一种临床常用的血液制品，多年居于畅销药物的前五位，在医药行业有着举足轻重的地位。

HSA主要是由肝脏产生的，是血液中含量最高的蛋白质，占血浆蛋白总量的50％-60％，占血浆总胶体渗透压的70％-80％，在调节血液和组织间的水分动态平衡方面起着重要作用。HSA自20世纪40年代应用于临床以来，一直有着“救命药”之称，在增加循环血容量和维持血浆渗透压方面起着重要作用，是治疗因失血、创伤、烧伤、整形外科手术及脑损伤、防治低蛋白血症以及肝硬化、肾水肿等恶性病变不可缺少的药物，而且在抗肿瘤及免疫治疗中也具有极大的需求。

由于白蛋白分子量较大，通过膜的速度较慢，从而其产生的胶体渗透压可以与毛细血管的静压力抗衡，以此来维持正常与恒定的血容量；同时白蛋白保留循环水的能力较强，从而起到增加循环血容量的作用。白蛋白对某些离子和化合物具有较高的亲和力，可与其可逆结合，发挥转运功能，将有毒物质转运至解毒器官，从而具有加速机体有毒物质的排出，可用于血浆置换和新生儿高胆红素血症。白蛋白也可为机体提供大量的氨基酸，20％HSA的氨基酸储备能力相当于全血的8倍，因此可用作机体的营养供给。对于需要营养干预的患者，HSA不作为直接蛋白质的补充来源。

人血白蛋白制品的主要成分为人血白蛋白，目前市售HSA为液体制剂或冻干粉末，其来源于健康人血浆，采用低温乙醇法进行分离纯化，经灭活病毒后使用。由于HSA在临床的广泛应用，极大的需求推动了HSA类药物的市场增长，据不完全统计，我国每年原料血浆投料约4000吨左右，生产人血白蛋白约120吨左右，远不能满足当前临床需求。巨大的市场需求和利益驱使，导致假冒伪劣产品流向市场，恶性事件频发，极大的危害了患者的生命安全和市场秩序。

假冒手段的层出不穷，给鉴别和监管部门造成了极大的困难。目前人血白蛋白鉴别和定量的标准主要遵循2010版《中国药典》，采用免疫双扩散和免疫电泳法进行鉴别，凯氏定氮法进行定量检测，操作相对繁琐，只适用于实验室的鉴别和检验，且若混有牛、马、羊、猪等其他种属白蛋白时，会出现假阳性反应，影响结果的判定。拉曼光谱法可用于人血白蛋白的快速检测，将样品的光谱图与特征拉曼光谱图进行对比，即可判断其真假伪劣，同时可进行粗略定量，是一种快速且专属性较强的检测方法，但缺点在于仪器价格昂贵。

为实现HSA特异、快速、有效的鉴别，本发明拟通过生物信息学手段，筛选出HSA的优势抗原表位，即为HSA的特异性表位。通过基因克隆表达技术，可大量制备抗原，并制备HSA特异性抗体，在此基础上拟建立一种HSA的检测试剂，用于HSA的快速鉴别。

发明内容

为建立一种专属性较强的可区别于其他物种的人血白蛋白快速检测技术，以实现其真假伪劣的鉴别，本发明通过对人、猪、马、牛、羊白蛋白抗原表位的生物信息学研究，取三段HSA优势抗原表位进行克隆表达，并利用HSA免疫鼠血清通过间接酶联免疫技术检验抗原的敏感性，利用人、猪、马、牛、羊白蛋白免疫鼠血清检验抗原的特异性，筛选具有抗原性、特异性的抗原表位，用于人血白蛋白的快速检测技术的进一步研究。

本发明的目的是提供人血白蛋白特异性抗原表位。

本发明公开的人血白蛋白特异性抗原表位，其氨基酸序列分别如序列表中下列序列所示：