[发明专利]利用激光辅助酶解促进蛋白质N末端肽段鉴定的方法

权利要求书

1.一种利用激光辅助酶解促进蛋白质N末端鉴定的方法，其特征在于具体步骤为：

首先，对蛋白进行氨基封闭，再加入胰蛋白酶，加入量为蛋白重量的2.5%-5%，得到蛋白和酶的混合物；

然后，利用808nm红外激光对蛋白和酶的混合物垂直照射5s以上，对其进行激光辅助酶解；

最后，利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱或者液相色谱质谱联用仪器进行蛋白质N末端的检测。

2.根据权利要求1所述的利用激光辅助酶解促进蛋白质N末端鉴定的方法，其特征在于所述对蛋白进行氨基封闭的具体操作步骤如下：

（1）将蛋白溶于4M以上的高浓度盐酸胍或尿素中进行变性处理；

（2）用等体积40-100mM三乙胺碳酸氢盐稀释后，再在溶液中加入5-8mM二硫苏糖醇，置于60℃及以上温度中反应0.5-1小时后，再加入2-2.5倍浓度的碘乙酰胺，闭光反应0.5-1小时；

（3）用50-100mM4-羟乙基哌嗪乙磺酸溶液的无氨缓冲体系对蛋白进行溶液置换，并重复2次以上置换动作；

（4）加入40-60mM甲醛和一半浓度的氰基硼氢化钠反应4-16小时，或在反应4小时后，再加入0.5-1倍剂量甲醛和氰基硼氢化钠反应2-6小时；

（5）用25-100mM三乙胺碳酸氢盐对蛋白进行溶液置换，并重复2次以上置换动作。

3.根据权利要求1所述的利用激光辅助酶解促进蛋白质N末端鉴定的方法，其特征在于所述的利用液相色谱质谱联用仪器进行分析鉴定中涉及搜库方式，其设置的搜库参数为：Semi-ArgC，2个漏切位点，固定修饰（Lysdimethylation，Cyscarbamidomethylation），可变修饰（Metoxidation，N-terminalacetylation，N-terminaldimethylation，N-terminalGlutopyro-Glu,N-terminalGlntopyro-Glu）；被鉴定到发生N-terminalacetylation，N-terminaldimethylation，N-terminalGlutopyro-Glu和N-terminalGlntopyro-Glu修饰的肽段，被归类为N末端肽总数。