[发明专利]一种分离测定恩格列净及其有关物质的方法

说明书

本发明公开了一种分离测定恩格列净及其有关物质的方法，该方法采用高效液相色谱法，以辛烷基硅烷键合硅胶填料或苯基硅烷键合硅胶填料为色谱柱，以磷酸溶液与甲醇、乙腈组成流动相，进行梯度洗脱。该方法可以将恩格列净及其有关物质很好分离，检测的重现性好、灵敏度高、专属性强、操作简便，有助于控制恩格列净的质量和用药安全。

技术领域

本发明属于药物分析方法领域，具体涉及一种采用高效液相色谱法分离测定降糖药恩格列净及其有关物质的方法。

背景技术

恩格列净为一种选择性钠-葡萄糖协同转运蛋白(SGLT)抑制剂，用于治疗成人II型糖尿病。恩格列净通过对钠-葡萄糖协同转运蛋白选择性抑制作用，限制了大部分葡萄糖在体内的重吸收，促使葡糖大量从尿中排出达到控制血糖水平的目的。

恩格列净的化学结构式如下：

其化学名为： (1S)-1,5-脱水-1-C-[4-氯-3-[[4-[[(3S)-四氢-3-呋喃基]氧基]苯基]甲基]苯基]-D-葡萄糖醇。恩格列净为全合成化学药，反应过程中可能产生的副产物或残留的中间体会影响其纯度和质量；在其储存过程中，可能会因为温度、光照等环境因素导致降解产物产生，也会影响其纯度和质量。这些残留的中间体、副反应产物、降解产物就是通常药物质量控制中所说的有关物质。

目前，有关恩格列净及其组合物的有关物质测定方法未见报道，为保证恩格列净原料药及其药物组合物的质量可控，以确保其有效性和安全性，亟需一种有效的检测方法，能够有效分离测定恩格列净及其有关物质。本发明人经过大量的科学试验和测试条件的筛选，发现一种快速分离测定恩格列净及其有关物质的方法，该方法可以有效控制了恩格列净的工艺杂质和降解产物，保证了恩格列净原料药及其药物组合物的质量可控，从而完成了本发明。

本发明人发现，已上市的恩格列净片剂，其中含有的乳糖、微晶纤维素等药用辅料在本发明的方法中不会干扰测定恩格列净及其有关物质的测定。因此，本发明同样适用于恩格列净的药物组合物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种分离测定恩格列净及其有关物质的方法，该方法能将恩格列净与其有关物质有效分离，准确检测恩格列净原料药和其药物组合物中的有关物质，从而控制恩格列净的质量，确保恩格列净药品的有效性和安全性。

为实现本发明的目的，提供如下实施方案。

在实施方案中，本发明是一种分离测定恩格列净及其有关物质的方法，该方法包括采用高效液相色谱法，以辛烷基硅烷键合硅胶填料柱或苯基硅烷键合硅胶填料柱为色谱柱，以磷酸溶液或磷酸盐缓冲液为水相与以甲醇乙腈组成的有机相混合作为流动相，进行梯度洗脱，以紫外检测器进行检测。

在上述实施方案中，本发明的方法，所述磷酸溶液或磷酸盐缓冲液的pH值为2～6，优选为3.5，其中，所述磷酸盐缓冲液所用磷酸盐选自磷酸二氢钠、磷酸二氢钾和磷酸二氢铵，优选磷酸盐为磷酸二氢钠，用磷酸溶液调节pH值，水相中磷酸盐浓度为0～0.005mol/L，优选0.002 mol/L。

在上述实施方案中，本发明的方法，所述有机相为甲醇与乙腈的混合溶液，其中，甲醇-乙腈的体积比为50:50。

在上述实施方案中，本发明的方法，水相与有机相的洗脱初始体积比为65∶35～45∶55，优选55∶45，水相与有机相的洗脱终止体积比为35∶65～15∶85，优选25∶75。

在上述实施方案中，本发明的方法，紫外检测波长为200～250nm，优选为224nm。

在上述实施方案中，本发明的方法，进一步包括以下步骤：

（1）取恩格列净原料药或其药物组合物，加流动相使恩格列净完全溶解并稀释定容，配制成每1ml溶液中含恩格列净0.4～0.8mg，优选0.8mg,滤过，作为供试品溶液；