[发明专利]一种香型抗稻瘟病水稻新品种的高效选育方法

权利要求书

1.一种香型抗稻瘟病水稻新品种的高效选育方法，其特征在于：以广适、优质的香型水稻恢复系丰香恢一号为受体亲本，以携带抗稻瘟病基因的抗稻瘟病水稻材料为供体亲本，结合常规育种技术，综合利用高通量分子标记辅助选择技术、水稻花药离体培养技术、香味人工鼻子嗅闻和抗性田间鉴定手段，育成香味稳定、稻瘟病抗性好且农艺性状优良的抗性改良香型水稻丰香恢一号恢复系，再与不育系进行组合测配，高效选育出香型抗稻瘟病水稻新品种。

2.根据权利要求1所述的香型抗稻瘟病水稻新品种的高效选育方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)以广适、优质的香型水稻恢复系丰香恢一号为受体亲本，以携带抗稻瘟病基因的抗稻瘟病水稻材料为供体亲本，杂交获得杂种F₁代种子；

(2)种植杂种F₁代种子，并将杂种F₁代与步骤(1)所述的受体亲本回交，获得BC₁F₁代种子；

(3)种植BC₁F₁代种子，并通过高通量分子标记辅助选择技术和香味人工鼻子嗅闻的方式，选取成功导入有抗稻瘟病基因且具有香味的BC₁F₁代植株与步骤(1)所述的受体亲本进行回交，获得BC₂F₁代种子；

(4)种植BC₂F₁代种子，并通过高通量分子标记辅助选择技术和香味人工鼻子嗅闻的方式，选取成功导入有抗稻瘟病基因且具有香味的BC₂F₁代植株；

(5)在步骤(4)所选取的BC₂F₁代植株中再次选取田间农艺性状表现优良的植株，取花药进行离体培养，获得双单倍体D₁代花培株系；

(6)检测双单倍体D₁代花培株系的抗稻瘟病基因的基因型，选取与供体亲本基因型一致的植株移入大田，单株收种、种植，获得D₂代株系并鉴定稻瘟病抗性，筛选香味稳定、稻瘟病抗性好且农艺性状优良的D₂代株系套袋自交，获得抗性改良香型水稻丰香恢一号恢复系；

(7)对筛选得到的抗性改良的香型水稻丰香恢一号恢复系与不育系进行组合测配，选育出优质、广适的香型抗稻瘟病水稻新品种。

3.根据权利要求1或2所述的香型抗稻瘟病水稻新品种的高效选育方法，其特征在于：所述携带抗稻瘟病基因的抗稻瘟病水稻材料是携带抗稻瘟病双基因Pi1、Pi2的抗稻瘟病水稻材料。

4.根据权利要求1或2所述的香型抗稻瘟病水稻新品种的高效选育方法，其特征在于：通过高通量分子标记辅助选择技术选取导入有抗稻瘟病基因的目标植株的具体步骤是：

(1)高通量DNA快速提取：

每个单株的叶片取1.0cm×1.0cm大小的样品，放入96孔PCR管中，加入0.2MNaOH溶液40μL，在沸水中煮45s，然后加入0.17M的Tris-HCI溶液60μL，在沸水中煮沸2min后置冰上冷却，获得DNA提取液4℃下保存待用；

(2)Pi1、Pi2两重快速PCR反应：

在PCR反应管中分别加入1μLDNA提取液、Buffer、dNTP、引物P1、引物P2、ddH₂O和Taq酶；先94℃预变性4′；再94℃变性15″，55℃退火15″，72℃延伸30″，35个循环；72℃延伸7′；反应完成后，加入6×Loadingbuffer终止反应，置4℃环境下保存备用；

(3)高效聚丙烯酰胺凝胶电泳：

先将分离胶缓慢注入两玻璃板之间，静置凝固半小时以上；再将玻璃板装上电泳槽，插100齿梳子、点样，2000V、85W条件下电泳8分钟，断开电源；第二次点样，2000V、85W条件下电泳25分钟，断开电源；最后下胶，将胶板用清水漂洗15″；放入染色盆中染色8′；取出胶板，用清水漂洗25″；放入显影液中显影至DNA带清晰；再水洗1′；待胶板晾干后于读X光片的灯箱下观察记录结果。

5.根据权利要求2所述的香型抗稻瘟病水稻新品种的高效选育方法，其特征在于：步骤(6)鉴定D2代株系稻瘟病抗性是采用人工接种和大田诱导相结合的方法进行。