[发明专利]聚酰胺柱和大孔树脂柱联柱法去除西洋参多糖提取物中蛋白质和色素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种有效去除西洋参多糖提取物中蛋白质和色素的方法，用于食药工业中西洋参多糖的提取纯化，并为其进一步的加工提供重要依据。

背景技术

西洋参（PanaxquinquefoliumL.）英文名：Americanginseng，又名美国参旗参、西洋人参洋参、花旗参、广东人参，系五加科人参属多年生草本植物，西洋参起源于北美原始森林，主要分布于美国和加拿大。20世纪80年代初在我国引种成功后，种植面积逐年扩大，现已成为世界上生产西洋参的第三大国，亦是世界上最大的西洋参消费国。西洋参一直以来被人们视为保健佳品，其独特的药理作用也引起了众多学者的关注，现代药理研究表明，西洋参中含有多种活性成分，如皂苷、多糖、多肽、黄酮类物质、氨基酸等，随着多糖逐渐为消费者所接受，西洋参多糖药品及保健食品的开发也逐渐成为西洋参研究的热点之一。西洋参多糖（PPQ）是西洋参中含量最多的一类具有特殊生物活性的物质，西洋参及其提取物的可溶性果胶中均含有一定的多糖类成分，目前分离出来的成分有蔗糖、人参三糖、麦芽糖、葡萄糖、果糖、山梨糖、半乳糖醛酸、半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、鼠李糖等。西洋参多糖在西洋参根中含量达11.7%左右。

近年来，天然多糖的研究逐渐受到人们的重视，其在发育、分化、神经系统和免疫系统衡态的维持等方面起着重要作用。药理学研究也表明，一些植物多糖有调节机体免疫功能、降血糖、降血脂、抗肿瘤等方面的生物活性。由于多糖组成复杂、结构相似，其分离纯化和结构鉴定较为困难，以致很多药理试验采用多糖粗品为实验材料，这极大地影响了多糖构效关系研究的进程，导致多糖的高级结构与生物活性的关系至今还不十分清楚。

多糖的纯化首要考虑去除游离蛋白质。因为蛋白质常与多糖共存于植物体内，两者分子量相近、性质相似，在提取中常一起被提取出来。传统多糖溶液脱蛋白方法主要是Sevage法、TCA法以及酶法，活性炭法、双氧水法以及离子交换法则是目前常用的多糖脱色方法。查阅相关文献证明Sevage法反复多次可以很好的去除蛋白质，但操作麻烦耗时多，且有机溶剂用量大污染环境。TCA法由于酸水解蛋白的同时一定程度上也破坏了多糖的结构，对于后续多糖结构分析和活性测定方面都有所影响。酶法多糖损失少，单纯使用酶法脱蛋白效果并不是特别理想，成本较高不适宜工业化生产。至于三种脱色方法脱色率差别不是很大，但由于粉末型活性碳吸附力较强，吸附色素的同时也吸附了一定量的多糖，其多糖损失率较大。双氧水脱色率较活性碳较高，但其原理上是把有色物质氧化为无色，本质没有去除色素，且氧化色素的同时多糖也被氧化分解，多糖损失较大。

发明内容

本发明的目的是提供一种聚酰胺柱和大孔树脂柱联柱法去除西洋参多糖提取物中蛋白质和色素的方法，本方法纯化条件温和既不破坏人参多糖的有效成分,又不影响多糖得率,同时又能有效的除去多糖中的蛋白质和色素，且柱层析系统便于实现工厂化，可用于大规模处理。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种聚酰胺柱和大孔树脂柱联柱法去除西洋参多糖提取物中蛋白质和色素的方法，包括如下步骤：

一、西洋参粗多糖的制备

（1）西洋参整根经生物粉碎机粉碎，过20~80目筛，得西洋参粉；

（2）取干燥至恒重的西洋参粉以料液比1：10~40g/ml加入60~95%的乙醇60~90℃水浴回流1~6h，离心弃上清液，沉淀重复1~3次，烘干沉淀以料液比1：10~40g/ml加入蒸馏水在60~100℃水浴回流提取1~6h，离心收集沉淀，沉淀重复1~3次，合并上清液；

（3）浓缩上清液，加入乙醇使醇浓度达60~95%置于冰箱中2~6℃醇沉至4~12h；

（4）离心后得沉淀经无水乙醇、无水乙醚、丙酮依次洗涤后减压冷冻干燥得西洋参粗多糖干品。

二、联合柱层析

（1）称取一定量的西洋参粗多糖，用去离子水在30~60℃的水浴锅中震摇溶解，使得多糖浓度在1~20mg/ml，离心去除不溶物后作为粗糖原液备用；

（2）选用Ф26mm×600mm的层析柱×2，分别填入150~300ml处理好的聚酰胺和大孔树脂，并串联两柱，先用3~4倍柱体积去离子水从聚酰胺柱端进行平衡，将配置好的西洋参粗多糖原液，从聚酰胺柱端进行上样，吸附平衡一定时间后，再用去离子水洗脱，收集洗脱液，真空浓缩，冷冻干燥后得到无色无蛋白多糖，控制上样量为1~5g，上样体积为0.5~2.5BV，吸附平衡时间为10~60min，洗脱速率为2~10mL/min。