[发明专利]一种CHO细胞分泌能力评价系统

权利要求书

1.一种CHO细胞分泌能力评估系统，其特征在于，所述系统包括一种真核表达载体以及该真核表达载体稳定整合到CHO基因组的CHO细胞株；整个评估系统包括2个单元，包括：影响CHO分泌能力的DNA调控片段单元，以及从基因组中删除的报道抗体表达水平的评价单元；

所述从基因组中删除的报道抗体表达水平的评价单元包括3种调控元件：a)piggy转座子调控元件，b)GS筛选基因表达元件，c)抗体-LucGFP融合报道基因表达元件；

在piggy转座子元件之外插入影响CHO分泌能力的DNA调控片段；在piggy转座子元件的左臂和右臂之间插入GS筛选基因表达单元、抗体-LucGFP融合报道基因表达单元和影响CHO分泌能力的具有剪切或者编辑基因组DNA片段功能的CRISPR系统、TALEN系统或者ZFN系统。

2.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，在piggy转座子元件之外插入的影响CHO分泌能力的DNA调控片段为编码蛋白的基因表达元件、shRNA或者microRNA表达元件。

3.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，所述系统还包括：表达抗体-LucGFP融合报道基因的2个表达单元；每个表达单元含有1条抗体重链和1条抗体轻链，其中重链抗体分子与lucGFP报道基因构成融合基因，用于方便检测抗体表达水平；抗体重链-lucGFP融合基因和轻链基因分别被不同强启动子hCMV或者hEEF1a进行启动表达；两个表达单元串联在一起以提高抗体报道表达分子的拷贝数。

4.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，含有谷氨酰胺合成酶(GS)基因作为筛选标记，在GS基因敲除的CHO-GS(-/-)细胞株中将评价体系中的4种调控元件定点整合到CHO细胞基因组beta-actin基因上游6kb处。

5.根据权利要求1所述的系统，将线性化的所述DNA调控片段单元、评价单元的真核表达载体与一对TALEN表达质粒共转染到CHO细胞株中，筛选和鉴定定点整合的带有DNA调控片段单元、评价单元的CHO细胞株；并将线性化的包括评价单元的空白真核表达载体与一对TALEN表达质粒共转染到CHO细胞株中，筛选和鉴定定点整合的带有评价单元的CHO细胞株；比较两种细胞株抗体-lucGFP融合蛋白表达量，评价DNA调控片段单元对CHO分泌表达能力的影响与功能。

6.根据权利要求5所述的系统，其特征在于，对于抗体-lucGFP融合蛋白表达量提高的CHO细胞株，通过瞬时表达piggy BAC转座酶将整合到CHO基因组中的piggy转座子元件的左臂和右臂之间的DNA片段进行删除，获得删除了抗体表达水平的评价单元同时蛋白分泌能力得到提高的CHO细胞株。