[发明专利]一种三倍体矮牵牛的培育方法

权利要求书

1.一种三倍体矮牵牛的培育方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

1)选择杂交优势较强的二倍体组合作为亲本，按常规技术种植；

2)在亲本进入花期时，用化学诱导剂诱导父本植株上的花蕾，使之产生2n花粉；

3)诱导后花蕾纵轴长度生长至1.5cm~2.6cm时，采摘放置于低温、干燥、黑暗处保存；

4)杂交前对母本进行去雄处理，将步骤3）中诱导花蕾中的2n花粉取出，涂于母本去雄花蕾的柱头上，植株结实后得到F1杂交种子；同时将父本没有经过诱导处理的n花粉涂于母本去雄花蕾的柱头上，植株结实后得到对照二倍体F₁杂交种子；

5)将F₁杂交种子生长至成植，筛选出三倍体植株。

2.根据权利要求1所述的一种三倍体矮牵牛的培育方法，其特征在于，所述的化学诱导剂为秋水仙素、氨磺灵和氟乐灵的混合药液，其中秋水仙素的最终质量浓度为0.1%～0.5％，氨磺灵最终质量浓度为20mg.L^-1～50mg.L^-1，氟乐灵最终质量浓度为50mg.L^-1～100mg.L^-1。

3.根据权利要求1所述的一种三倍体矮牵牛的培育方法，其特征在于，所述步骤2）诱导的方法为：选择父本植株上纵轴长度为2.2mm~3.4mm花蕾，用微量注射器将化学诱导剂混合药液注入花蕾内，每次10～15μL，连续1~3天。

4.根据权利要求1所述的一种三倍体矮牵牛的培育方法，其特征在于，所述步骤5）的筛选方法为：将F₁杂交种、对照二倍体F₁杂交种按常规技术种植，成株后先进行农艺性状、解剖学比较，选择多倍体特征明显的植株，再进行细胞学染色体检测确定三倍体植株。

5.根据权利要求1所述的一种三倍体矮牵牛的培育方法，其特征在于，所述步骤1）中杂交优势较强的二倍体组合是指F₁杂交后代的株高、冠幅、茎粗、叶面积、开花数的农艺性状超过双亲。

6.根据权利要求4所述的一种三倍体矮牵牛的培育方法，其特征在于，所述步骤5）中农艺性状为：叶片长度与宽度、叶面是否扭曲、茎粗、株高、冠幅、萼片长度与宽度、柱头和花药大小、花瓣直径、花瓣边缘褶皱程度。

7.根据权利要求4所述的一种三倍体矮牵牛的培育方法，其特征在于，所述步骤5）中解剖学观察性状有气孔和花粉细胞，观察气孔方法为：将叶片背面表皮撕下，在显微镜下测量表皮气孔大小；观察花粉细胞方法为：对成熟花粉进行染色，在显微镜镜下测量成熟花粉细胞大小。

8.根据权利要求4所述的一种三倍体矮牵牛的培育方法，其特征在于，所述步骤5）中细胞学染色体检测方法为：

取长度3.1~7.3mm的幼蕾，0.002mol.L^-18-羟基喹啉水溶液0~10℃预处理1~5小时，蒸馏水冲洗3~5次后转入卡诺氏固定液固定12~24小时，蒸馏水冲洗3~5次，1mol.L-1HCl溶液50~60℃水浴解离3~6分钟，蒸馏水冲洗3~5次用滤纸吸干水，放入体积百分浓度45%醋酸溶液配制的质量浓度1%的洋红染色液染色12~24小时，用镊子将幼蕾移入干净的载玻片上，用刀片切取雌蕊子房，用镊子取子房中心部位少量分生组织，放置于载玻片上，滴1~2滴1%洋红染色液，压片观察统计体细胞染色体数目，筛选2n=3x=21的三倍体植株。

9.根据权利要求8所述的一种三倍体矮牵牛的培育方法，其特征在于，所述卡诺氏固定液是由无水乙醇和冰醋酸按体积比3:1制成的。

10.根据权利要求8所述的一种三倍体矮牵牛的培育方法，其特征在于，所述体积百分浓度45%醋酸溶液配制的质量浓度1%的洋红染色液配制方法为：先加入45ml乙酸再加水55ml，混匀后将洋红粉末1克缓慢倒入100ml45%醋酸溶液中，边煮边搅拌，煮沸冷却后过滤即可使用。