[发明专利]一种超声波辅助外源基因转化乳酸乳球菌的方法

权利要求书

1.一种超声波辅助外源基因转化乳酸乳球菌的方法，其特征在于，所述方法为：将携带外源基因的表达质粒与乳酸乳球菌感受态细胞悬液混合，在28～32℃、超声波场强200～500W的条件下进行转化反应，转化反应结束后，筛选获得含外源基因的乳酸乳球菌的阳性转化子；所述乳酸乳球菌感受态细胞悬液是由乳酸乳球菌感受态细胞与冰水预冷的溶液Ⅰ重悬而成；所述溶液Ⅰ组成为：0.4～0.6mol/L蔗糖，90～110mL/L甘油，溶剂为水。

2.如权利要求1所述超声波辅助外源基因转化乳酸乳球菌的方法，其特征在于所述转化反应在28～32℃、超声波场强200～500W的条件下反应10～30min。

3.如权利要求1所述超声波辅助外源基因转化乳酸乳球菌的方法，其特征在于所述携带外源基因的表达质粒中外源基因为胆固醇氧化酶基因。

4.如权利要求1所述超声波辅助外源基因转化乳酸乳球菌的方法，其特征在于所述乳酸乳球菌为乳酸乳球菌NZ3900。

5.如权利要求1所述超声波辅助外源基因转化乳酸乳球菌的方法，其特征在于所述携带外源基因的表达质粒与乳酸乳球菌感受态细胞悬液体积比为1:40-55，所述乳酸乳球菌感受态细胞悬液中湿菌体含量为1×10⁷～1×10⁸个细胞/ml。

6.如权利要求1所述超声波辅助外源基因转化乳酸乳球菌的方法，其特征在于所述乳酸乳球菌感受态细胞按如下步骤制备：将乳酸乳球菌接种至GM17培养液中，28～32℃静置培养10-14h，取培养液以体积浓度5％的接种量接种到SGM17培养液中，28～32℃静置培养10-14h，再以体积浓度8-12％的接种量转接于SGM17培养液中，28～32℃静置培养2-6h，将培养液冰浴20～25min后，在4℃、4000-5000r/min条件下离心10-15min，收集湿菌体；将湿菌体用冰水预冷的溶液Ⅰ重悬，冰上静置20～25min后，于4℃，4000-5000r/min离心10-15min，弃上清，用冰水预冷的溶液Ⅱ重悬菌体，冰上静置20～25min后，4000-5000r/min离心10-15min，弃上清，用冰水预冷的溶液Ⅰ重悬菌体，冰上静置20～25min后，于4℃，4000-5000r/min离心10-15min，弃上清，最后用冰水预冷的溶液Ⅰ重悬菌体，获得乳酸乳球菌感受态细胞悬液；所述GM17培养基组成为：M17培养基+4～6g/L葡萄糖；SGM17培养基组成为：0.4～0.6mol/L蔗糖+20～30g/L甘氨酸+4～6g/L葡萄糖+M17培养基；所述溶液Ⅰ组成为：0.4～0.6mol/L蔗糖，90～110mL/L甘油，溶剂为水；溶液Ⅱ组成为：0.4～0.6mol/L蔗糖，90～110mL/L甘油，0.04～0.06mol/LEDTA，溶剂为水。

7.如权利要求1所述超声波辅助外源基因转化乳酸乳球菌的方法，其特征在于所述携带胆固醇氧化酶基因的表达质粒为pNZ8149质粒。