[发明专利]以杆状病毒为载体的广谱禽流感疫苗及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种以杆状病毒为载体的广谱禽流感疫苗及其制备方法和应用。

背景技术

禽流感(Avianinfluenza,AI)是由A型流感病毒引起的一种以侵害禽类呼吸系统为主的传染性疾病。根据禽流感病毒致病性的不同，可以将禽流感分为高致病性禽流感，低致病性禽流感和非致病性禽流感。其中由H5和H7亚型毒株(以H5N1和H7N7为代表)所引起的疾病称为高致病性禽流感。高致病性禽流感传染性强，发病率和致死率高。自1959年英国首次暴发高致病性禽流感，并分离到H5N1亚型禽流感病毒以来，H5N1亚型禽流感迅速传播到世界各地，给世界养禽业带来了巨大的经济损失。更为严重的是，随着病毒的进化，H5N1亚型禽流感病毒已经突破了禽类与哺乳动物的种间屏障，可直接感染人。1997年香港暴发H5N1亚型禽流感，有18个人感染并有6人死亡，之后H5N1亚型高致病性禽流感感染致人死亡的事件时有发生，发生疫情的地区也逐渐从亚洲蔓延至欧洲和非洲。尽管目前H5N1亚型禽流感尚不具备人传人的特点，但是随着流感病毒的不断进化与广泛传播，H5N1亚型禽流感病毒实现在人群之间的传播存在巨大可能性。因此有效防控H5N1亚型禽流感不仅能够挽回大量的经济损失，而且具有重要的公共卫生意义。

国内外禽流感防治经验表明，控制禽流感大规模流行和降低损失最有效的途径是接种疫苗。禽流感疫苗主要分为全病毒灭活疫苗、减毒活疫苗和基因工程疫苗三大类。减毒活疫苗由于存在生物安全隐患，目前尚不允许在禽类中使用。基因工程疫苗中，目前只有以鸡痘病毒和新城疫病毒为载体构建的重组活病毒疫苗获得了国家新兽药证书。当前H5N1亚型禽流感的防控主要依赖全病毒灭活苗，灭活苗安全性好，免疫原性强，但存在一些缺陷：(1)灭活苗保护性抗原主要是囊膜蛋白HA和NA，而HA和NA具有型特异性和高度变异性，所诱导的抗体交叉保护力弱，因此灭活苗很难有效应对不同亚型流感病毒的感染以及H5N1亚型禽流感病毒自身的快速变异；(2)禽流感主要经过呼吸道传染，因此呼吸道粘膜免疫是防止病毒入侵和扩散的关键环节，而灭活苗通过肌肉注射接种，不能有效地诱导粘膜免疫力，而且这种肌肉接种方式效率低，成本高；(3)灭活苗的生产采用鸡胚培养法，疫苗的产量过度依赖于鸡胚。此外，除了疫苗株种子批的建立是使用SPF鸡胚，疫苗临床生产主要依靠健康鸡群来源的普通鸡胚，而普通鸡胚可能含有一些其他病毒，因此疫苗存在其他病原污染的可能性。(4)灭活苗主要激活体液免疫应答，无法诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxiclymphocyte,CTL)，而CTL的杀伤和清除功能对于流感的恢复非常重要。这些特点极大地影响了禽流感灭活苗的安全性、有效性和经济性，因此迫切需要研制一种新型广谱的、可诱导呼吸道粘膜免疫反应的禽流感疫苗来预防H5N1亚型禽流感，以填补传统疫苗的缺陷。

目前，广谱流感疫苗的研究都集中在流感病毒保守蛋白。流感病毒基质蛋白M2为流感病毒的跨膜蛋白之一，M2的氨基酸序列高度保守，其胞外域的24个氨基酸(M2e)在禽流感病毒中几乎完全相同。研究表明，M2e含有M2的主要保护性抗原决定簇，其作为抗原可以诱导免疫保护，并且具有一定程度的交叉保护力。此外，关于M2e的免疫保护机制也很清楚。M2e特异性抗体不具有中和活性，但可以通过抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(antibodydependentcellmediatedcytotoxicity,ADCC)消灭被感染的细胞，限制病毒的复制，从而降低流感的发病率和死亡率。目前，基于M2e的广谱流感疫苗研究进展迅速，某些产品现在已经进入临床试验，比如赛诺菲巴斯德公司研发的表面展示M2e的病毒样颗粒(VLP)疫苗，以及VaxInnate公司的M2e与鞭毛蛋白融合表达的疫苗。