[发明专利]一种注射用胸腺肽的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及药品检测技术领域，更具体地说，是涉及一种注射用胸腺肽的检测方法。

背景技术

注射用胸腺肽是由动物脏器提取的多组分混合物，用于治疗各种原发性或继发性T细胞缺陷病、某些自身免疫性疾病、各种细胞免疫功能低下的疾病及肿瘤的辅助治疗。在注射用胸腺肽中，不仅含有分子量为3108的胸腺肽α₁，还含有的分子量大于10000的高分子质量蛋白以及其他复杂成分。其中，胸腺肽α₁是注射用胸腺肽的主要活性成分，是一种针对T细胞的免疫增强剂；而高分子质量蛋白会引起过敏等安全隐患。因此，为保证药品的质量、确保临床用药的安全性，对注射用胸腺肽进行检测至关重要。

目前，《国家药品标准》第十六册收载的检测胸腺肽溶液质量标准采用高效液相色谱法，以核糖核酸酶A(分子量为13700)、胰岛素(分子量为5808)、胸腺肽α₁(分子量为3108)和生长激素释放抑制因子(分子量为1521)作为对照品进行检测。在检测过程中，为了保证所配置的色谱条件和设定的参数的适用性以及确定分析使用的色谱条件的有效性，需要对理论板数与分离度进行考察。其中，理论板数是以被分析物主峰或规定的色谱峰计算柱效，用来确定色谱峰的尖锐程度，特别在测定微量成分时尤为重要，由于核糖核酸酶A分子量大于10000且在注射用胸腺肽中的含量不超过5％，因此理论板数按核糖核酸酶A计算；而分离度是指注射用胸腺肽中各组分在高效液相色谱法中分离的程度，由于胸腺肽α₁是一种小分子多肽，化学合成的多肽中含有的部分杂质分子结构和化学性质与目标物十分相似，给其分离纯化带来很大困难，因此必须保证被测成分峰与其他色谱峰完全分离。

但是，按照现行《国家药品标准》WS1-XG-044-2000(以下简称法定标准)中色谱条件进行检测，得到的理论板数与分离度均达不到法定标准的要求，从而影响到产品的正常检测。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种注射用胸腺肽的检测方法，本发明提供的检测方法能够保证理论板数和分离度均达到法定标准要求，使检测结果真实可靠。

本发明提供了一种注射用胸腺肽的检测方法，包括：

a)将注射用胸腺肽待测样品与流动相混合后，进行液相色谱检测，得到注射用胸腺肽待测样品的液相色谱图；

所述流动相为三氟醋酸、乙腈和水的混合物；所述三氟醋酸、乙腈和水的体积比为(0.01～0.5)：20：80；

b)根据标准样品溶液液相色谱图的保留时间与所述标准样品的分子量关系，建立标准曲线；

根据所述注射用胸腺肽待测样品的液相色谱图与所述标准曲线，得到注射用胸腺肽待测样品中有效成分和有害物质的含量。

优选的，所述三氟醋酸、乙腈和水的体积比为0.05：20：80。

优选的，步骤a)中所述注射用胸腺肽待测样品与流动相的用量比为(0.5mg～1.5mg)：1mL。

优选的，步骤a)中所述液相色谱检测的色谱柱为TSKGEL2005WX1型凝胶色谱柱。

优选的，步骤a)中所述液相色谱检测的流动相流速为0.5mL/min～1.0mL/min。

优选的，步骤a)中所述液相色谱检测的波长为200nm～220nm。

优选的，步骤a)中所述液相色谱检测的柱温为25℃～35℃。

优选的，步骤a)中所述液相色谱检测的进样量为15μL～25μL。

优选的，步骤b)中所述标准溶液的浓度为0.5mg/mL～1.5mg/mL。

本发明提供了一种注射用胸腺肽的检测方法，包括：a)将注射用胸腺肽待测样品与流动相混合后，进行液相色谱检测，得到注射用胸腺肽待测样品的液相色谱图；所述流动相为三氟醋酸、乙腈和水的混合物；所述三氟醋酸、乙腈和水的体积比为(0.01～0.5)：20：80；b)根据标准样品溶液液相色谱图的保留时间与所述标准样品的分子量关系，建立标准曲线；根据所述注射用胸腺肽待测样品的液相色谱图与所述标准曲线，得到注射用胸腺肽待测样品中有效成分和有害物质的含量。与现有技术相比，本发明提供的检测方法能够保证理论板数和分离度均达到法定标准要求，使检测结果真实可靠。实验结果表明，本发明提供的检测方法的理论板数能够达到8574，远高于法定标准的5000，分离度为7.5～22.3，远高于法定标准要求的3.0。

附图说明

图1为实施例1提供的核糖核酸酶A标准样品溶液的高效液相色谱图；

图2为实施例1提供的胰岛素标准样品溶液的高效液相色谱图；