[发明专利]纳米金催化铜沉积介导的浓度依赖多色转变比色分析方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于检测领域，具体涉及纳米金催化铜沉积介导的浓度依赖多色转变比色分析方法及应用。

背景技术

定量或半定量比色分析作为生化检测的主要手段，在环保评价、食品安全、疾病诊断、肿瘤标志物检测方面有着广泛应用。比色分析因其方法简便直观、分析时间短、所用仪器少脱颖而出，成为生化分析检测的重要手段。对于已有的比色分析法，大都是从深到浅或从浅到深的一种颜色变化，这样的比色法难以用肉眼判断待测物的大致含量，必须借助精密仪器来测定，这大大限制了比色法在实际应用中的发展。因此，急需一种能够多色转变的分析方法，能够通过肉眼进行半定量分析，借助仪器实现定量检测。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供纳米金催化铜沉积介导的浓度依赖多色转变比色分析方法；本发明的目的之二在于提供该分析方法在定量或半定量检测生化分子含量中的应用。

为实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案：

1、纳米金催化铜沉积介导的浓度依赖多色转变比色分析方法，将捕获样品中待检测物的特异性识别分子包被在固相载体上，然后将待检测物与包被在固相载体上的特异性识别分子进行特异性反应，再在反应后的待检测物表面引入纳米金标记的检测探针，接着在纳米金表面沉积铜，再加入含Fe³⁺和[Fe(CN)6]^3-的显色剂显色，最后通过颜色半定量判断待测检物含量或利用紫外可见分光光度计定量检测待检测物。

优选的，沉积铜的方法如下：向引入纳米金标记检测探针的固相载体上加入含12～500mM硫酸铜和12～500mM抗坏血酸的沉积铜试剂，孵育，清洗即可。

优选的，所述显色剂为含1～5mM三氯化铁和1～5mM铁氰化钾的溶液。

优选的，特异性识别分子包被固相载体的方法如下：将终浓度1～100μg mL^-1的抗待检测物特异性单克隆抗体加入固相载体上，4～8℃过夜或37℃孵育1～3h，然后封闭，再加入待检测物，37℃孵育0.5～2h，随后加入纳米金标记的检测探针孵育。

更优选的，所述待检测物为生物分子或化学分子，具体为蛋白质、糖类、脂类、核酸、细胞因子、生物毒素、农药、兽药等。

更优选的，所述检测探针为特异识别待检测物的生物分子。

最优选的，所述特异识别待检测物的生物分子为抗体、多肽、核酸适配体、凝集素或核酸探针。

2、所述分析方法在定量或半定量检测蛋白质、糖类、脂类、核酸、细胞因子、生物毒素、农药或兽药等生物或化学分子含量中的应用。

优选的，所述分析方法在定量或半定量生化分析中的应用。

本发明的有益效果在于：本发明公开了纳米金催化铜沉积介导的浓度依赖多色转变比色分析方法，采用纳米金标记的检测探针，避免了传统的酶标探针不易储存，反应条件苛刻等缺点，提供了更有利的反应条件；而且基于纳米金催化铜沉积的信号放大策略，通过调整沉积试剂的浓度和沉积时间长短，大大放大了检测信号，取得了更高的灵敏度和更低的检出限；使用三氯化铁和铁氰化钾显色，构造了一种浓度依赖的多色转变比色分析法，使得借助肉眼半定量判断待测物含量或浓度成为现实。使用常规的紫外可见分光光度计也可定进行量检测。

本发明基于纳米金催化铜沉积介导的浓度依赖的多色比色分析法，拥有操作简单、成本较低，且能通过肉眼半定量检测。很适合于快速的初期检测，有望在疾病标志物早期筛查、食品安全控制等方面得到广泛应用。

附图说明

为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图：

图1为纳米金催化铜沉积介导的浓度依赖的多色比色分析法检测原理图。

图2为不同浓度氯化亚铁和铁氰化钾混合溶液的显色图和紫外可见吸收光谱图。

图3为验证本发明是否可行实验显色图和紫外可见吸收光谱图(a和b分别没有包被纳米金，没有沉积铜显色之后的照片；c为在包被纳米金、沉积铜、显色之后的照片)。

图4为纳米金沉积前(a)后(b)及金铜复合物溶解后(c)的FE-SEM图。a图中红色箭头所指即为纳米金。

图5为对纳米金催化铜沉积不同沉积时间和沉积试剂浓度显色结果图。

图6为用纳米金催化铜沉积介导的浓度依赖的多色比色分析法检测结果图。

图7为用纳米金催化铜沉积介导的浓度依赖的多色比色分析法检测兔抗原时的紫外可见吸收光谱及标准曲线。图中的照片是俯拍和侧拍的显色结果。