[发明专利]芍药叶片组织培养直接成芽的培养基及培养方法

说明书

技术领域

本发明属于植物的组织培养领域，具体涉及一种芍药叶片组织培养直接成芽的培养基及培养方法。

背景技术

芍药(Paeonia lactiflora Pall.)是我国的传统名花，位列“花相”，仅次于“花王”牡丹，在我国已有4000多年的栽培历史。芍药的花朵硕大，花色艳丽，花型美观，花香馥郁，深受广大人民群众的喜爱，而一些具有新奇性状的品种，市场前景尤为广阔。如普通的3～5年生芍药栽培品种售价一般为20～30元，而较为新奇的品种如‘黄金轮’售价约为普通品种的10倍，并需求量巨大。而如何快速、高效地将这些新奇品种进行扩繁，是摆在种植者面前迫切需要解决的难题。

当前芍药最常用的繁殖方法是分株繁殖与播种繁殖，前者虽然能保持原品种的性状，但需要植株生长3～5年才能分一次，并且周期较长、繁殖系数较低，分株后的母株翌年观赏价值明显下降；后者既不能保持原品种的性状，又需要经过4～5的童期才能开花，因此，两者均不适宜进行大规模的商业化生产。植物组织培养是植物快速繁殖的一种最为有效的方法，与传统繁殖方法相比，组织培养既能保持原有品种和优良性状，扩大其繁殖系数，又不受季节的影响，可以周年运转，大幅度地提高了繁殖的效率。CN102428872B公开了一种通过种胚培养获得完整芍药植株的方法，但由于种胚并不能完全保持母本的性状，因此不能用于优良品种的扩繁。吴红娟等人发表的论文‘观赏芍药‘大富贵’丛生芽诱导及生根技术’(吴红娟,沈苗苗,于晓南.观赏芍药‘大富贵’丛生芽诱导及生根技术.东北林业大学学报,2011,39(9):20-22.)、‘芍药不同品种启动培养比较及‘朱砂判’丛生芽诱导的研究’(吴红娟,于晓南.芍药不同品种启动培养比较及‘朱砂判’丛生芽诱导的研究.内蒙古农业大学学报,2010,31(4):29-33.)报道了以地下休眠芽为外植体诱导丛生芽的方法，该方法对于优良品种的扩繁存在3点不足：①一个植株所包含的地下休眠芽数量有限，以其为外植体的繁殖效率不高；②每株组培苗只能产生3～5个丛生芽，繁殖系数不高；③整个过程必须经历一个地下芽启动培养的过程，耗费大量的人力、物力，提高成本。胡映泉等人发表的论文‘芍药不定芽的诱导技术’(胡映泉,冯海华,时宝凌.芍药不定芽的诱导技术,山西林业科技,2003,增刊:23-24,33.)对芍药嫩茎进行组织培养，在M S+BA 3.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L培养基上可一步成芽，缩短了成芽时间，但该论文数据较为含糊，统计的时间也未作交代，最终芽的诱导率最高只有74％。王吉凤等人发表的论文‘5个芍药品种愈伤组织诱导及分化研究’(王吉凤,李青,孟会.5个芍药品种愈伤组织诱导及分化研究.北京林业大学学报,2011,32(3):213-216.)中成功诱导出愈伤组织，并分化出不定芽，但其愈伤褐化严重、玻璃化、易碎，芽分化率低，仅有7.95％。孙晓梅等人发表的论文‘芍药愈伤组织诱导及不定芽分化的研究’(孙晓梅,程婉,刘萍,周文强,王丹,杨宏光.芍药愈伤组织诱导及不定芽分化的研究.沈阳农业大学学报,2014-02,45(1):24-27.)对芍药子叶、茎、叶片进行培养，以基部茎为最优的不定芽分化外植体，但分化率只有35％，且需经过愈伤诱导阶段。综上所述，在芍药组织培养过程中，前人均成功分化出不定芽，但是他们多以种胚、地下休眠芽、茎段等为外植体，不仅分化率低，而且继代次数多(分两步实施)，实验过程繁琐，周期较长，并不能获得理想的效果。

发明内容

本发明为了解决芍药组培过程中的关键技术问题，提供了一种以芍药叶片为外植体一步成芽的培养基及培养方法，为芍药优良品种快繁提供技术支撑。

本发明采用的芍药叶片组织培养直接成芽的培养基，其特征在于，改良MS基本培养基，添加TDZ 0.1～3.0mg·L^-1+椰汁5～15％，附加蔗糖30g·L^-1，水解酪蛋白600mg·L^-1，琼脂6.4g·L^-1，pH为5.8。

本发明还公开了一种芍药叶片组织培养直接成芽的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：3月下旬选取幼嫩的芍药叶片；灭菌后接种于培养基上温度25±2℃，暗培养2个月，获得不定芽；所述培养基是改良MS基本培养基，添加TDZ 0.1～3.0mg·L^-1+椰汁5～15％，附加蔗糖30g·L^-1，水解酪蛋白600mg·L^-1，琼脂6.4g·L^-1，pH为5.8。