[发明专利]芍药叶片组织培养直接成芽的培养基及培养方法

权利要求书

1.一种芍药叶片组织培养直接成芽的培养基，其特征在于，所述培养基是：改良MS基本培养基，添加TDZ 0.1～3.0mg·L^-1+椰汁5～15％，附加蔗糖30g·L^-1，水解酪蛋白600mg·L^-1，琼脂6.4g·L^-1，pH为5.8；所述改良MS基本培养基配方如下：

大量元素：硝酸钾KNO₃ 250mg/L，硝酸铵NH₄NO₃ 500mg/L，磷酸二氢钾KH₂PO₄ 550mg/L，硫酸镁MgSO₄·7H₂O 250mg/L，硝酸钙Ca(NO₃)₂·4H₂O 500mg/L；

微量元素：碘化钾KI 0.83mg/L，硼酸H₃BO₃ 6.2mg/L，硫酸锰MnSO₄·4H₂O 22.3mg/L，硫酸锌ZnSO₄·7H₂O 8.6mg/L，钼酸钠Na₂MoO₄·2H₂O 0.25mg/L，硫酸铜CuSO₄·5H₂O 0.025mg/L，氯化钴CoCl₂·6H₂O 0.025mg/L；

铁盐：乙二胺四乙酸二钠Na₂·EDTA 37.3mg/L，硫酸亚铁FeSO₄·7H₂O 27.8mg/L；

有机成分：肌醇100mg/L，甘氨酸2mg/L，盐酸硫胺素VB₁ 0.1mg/L，盐酸吡哆醇VB₆0.5mg/L，烟酸VB₅ 0.5mg/L，蔗糖30g/L，琼脂6.4g/L。

2.一种芍药叶片组织培养直接成芽的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：3月下旬选取幼嫩的芍药叶片；灭菌后接种于培养基上，温度25±2℃，暗培养2个月，获得不定芽；所述培养基是改良MS基本培养基，添加TDZ 0.1～3.0mg·L^-1+椰汁5～15％，附加蔗糖30g·L^-1，水解酪蛋白600mg·L^-1，琼脂6.4g·L^-1，pH为5.8；其中，所述改良MS基本培养基配方如下：

大量元素：硝酸钾KNO₃ 250mg/L，硝酸铵NH₄NO₃ 500mg/L，磷酸二氢钾KH₂PO₄ 550mg/L，硫酸镁MgSO₄·7H₂O 250mg/L，硝酸钙Ca(NO₃)₂·4H₂O 500mg/L；

微量元素：碘化钾KI 0.83mg/L，硼酸H₃BO₃ 6.2mg/L，硫酸锰MnSO₄·4H₂O 22.3mg/L，硫酸锌ZnSO₄·7H₂O 8.6mg/L，钼酸钠Na₂MoO₄·2H₂O 0.25mg/L，硫酸铜CuSO₄·5H₂O 0.025mg/L，氯化钴CoCl₂·6H₂O 0.025mg/L；

铁盐：乙二胺四乙酸二钠Na₂·EDTA 37.3mg/L，硫酸亚铁FeSO₄·7H₂O 27.8mg/L；

有机成分：肌醇100mg/L，甘氨酸2mg/L，盐酸硫胺素VB₁ 0.1mg/L，盐酸吡哆醇VB₆0.5mg/L，烟酸VB₅ 0.5mg/L，蔗糖30g/L，琼脂6.4g/L。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，叶片灭菌处理采用酒精与升汞相结合的灭菌方法，具体步骤如下：

①先将幼嫩叶片在流水中冲洗10min，去除外部泥土，再用洗洁精清洗一下，流水冲洗干净；

②将幼嫩叶片置于超净工作台上，放置于烧杯中，用75％酒精消毒30s，无菌水反复冲洗5～6次；

③再用0.1％升汞消毒3min，无菌水反复冲洗5～6次；

④外植体置于无菌滤纸上吸干水分，切去叶片的边缘部分和主脉，切成1cm×1cm的大小接种于培养基上，为避免交叉感染，每瓶接种3个叶片。