[发明专利]一种枯草芽孢杆菌发酵生产2;3-丁二醇的方法

权利要求书

1.一种利用枯草芽孢杆菌发酵生产2,3-丁二醇主产物的方法，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌为保藏号CCTCC No：M 2013181的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) SFA-H43菌株，所述方法包括种子液的制备和发酵培养过程，发酵采用葡萄糖作为碳源，发酵结束时控制发酵液中的葡萄糖浓度在0-10g/L；

种子液制备过程中采用的种子培养基为：葡萄糖50-100g/L，酵母膏3-8g/L，玉米浆干粉5-10g/L，氯化钠1-5g/L， pH7.0-7.2；

发酵培养的培养基为：葡萄糖150-200g/L，酵母膏5-10g/L，玉米浆干粉5-10g/L，尿素1-3g/L，pH6.0-6.5；

菌株在4℃冰箱保藏，使用前划线于LB培养基斜面活化，于35-38℃培养基中培养24-36h；挑取新鲜培养的斜面一环，接种于含有40-60mL种子培养基的500mL三角瓶中，摇床转速150-200r/min，培养温度35-38℃，培养时间12-16h，此为一级种子液；将培养成熟的一级种子液以1-10%的接种量接种于装有800-1200mL种子培养基的5000mL三角瓶中，培养温度35-38℃，转速为120-180r/min，培养时间为8-12h，此为二级种子液；

发酵过程采用分批发酵，5L发酵罐装液量3.0-3.5L，采用一级种子液接种，接种量5-10%，发酵条件为：温度35-38℃，搅拌转速为300-350r/min，通气量为1.5-2.0L/min，当发酵液中的葡萄糖浓度降至0-10g/L时结束发酵；

或者，发酵过程采用分批发酵，50L发酵罐装液量33-38L，采用二级种子液接种，接种量为5-10%，发酵条件为：温度35-38℃，搅拌转速为300-350r/min，通气量为1.0-1.5m³/h，当发酵液中的葡萄糖浓度降至0-10g/L时结束发酵；

或者，发酵过程采用50L发酵罐进行补料发酵，发酵罐装液量30-35L，采用二级种子液接种，接种量5-10%，发酵条件为：培养温度35-38℃，搅拌转速为300-350r/min，空气流量为1.0 -1.5m³/h，当发酵液中葡萄糖浓度低于10g/L时，通过分次补加或流加的方式向发酵罐中补加葡萄糖，分次补加的葡萄糖浓度为50g/L，流加过程保持发酵液中的葡萄糖浓度在20-30g/L。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，发酵结束时控制发酵液中的葡萄糖浓度在5g/L以上。