[发明专利]用于马来沉香鉴定的基因检测引物、探针和方法

说明书

本发明公开了一种马来沉香鉴定的基因检测引物、探针和方法，所述方法包括具有马来沉香的专属特异性引物、探针和PCR检测方法。利用本发明鉴定方法采样量少，并且能快速、准确、客观地得到马来沉香的种属鉴定结果。

技术领域

本发明涉及木材材种鉴定的基因检测领域，具体地说涉及对马来沉香的基因鉴定方法及其所使用的引物和探针。

背景技术

马来沉香是瑞香科沉香属的一种，分布在孟加拉国、印度、印度尼西亚、老挝、马来西亚、缅甸、菲律宾、新加坡、泰国等地，属于世界濒危保护树种，马来沉香是沉香的主要来源。以往一般通过理化鉴别和显微观察横切面法对沉香进行鉴别。

传统的木材鉴定识别方法是利用人工经验进行识别，主要通过对木材截面进行人工观察的方式完成。一般情况下依赖肉眼和放大镜进行宏观识别，而微观识别则需要使用光学显微镜观察其内部的解剖结构特征，也就是观察构成木材的各类细胞与组织的形态及排列特征，该方法涉及的识别特征较多，鉴定相对准确，但对于鉴定工作者的要求很高，要对此做出准确的鉴定，必须具有丰富的实践经验。近年来研究工作者开发了基于数字图像处理的木材图像识别技术，大大提高了木材识别的准确性,推动了木材识别技术的发展。但是，无论是基于识别者经验的传统识别技术还是基于计算机图像检索的识别技术，都没有脱离木材本身的形态结构及特征，鉴定识别工作都必须建立在所检木材有完整易辨识的形态结构的基础上，这就为木材识别工作带来了一定的局限性，同时，相近种属木材易出现材质结构的相似，为木材识别的准确性带来困难。

因此建立起以马来沉香的DNA条形码技术为基础的分子鉴定方法，实现马来沉香的简单、快速、准确、客观的鉴定是目前急需解决的问题。

发明内容

本发明提供一种用于用于马来沉香鉴定的基因检测引物和探针，所述引物和探针序列包括：

MLCX Primer-F：5'- TCCCGTTCGCTACTTTGACT -3'

MLCX Primer-R：5'- GCTATCCCGACCCTTACCA -3'

MLCX Primer Probe ：5'-VIC- TTGACATACACCCAAGC -MGB-3'。

进一步地，所述引物和探针的PCR反应条件为：95℃，2min；95℃ 15s，55℃ 34s，共40个循环。

进一步地，所述引物和探针的使用浓度比为：MLCX Primer-F:MLCX Primer-R:MLCX Primer Probe=1:1:2。

本发明还提供了一种用于马来沉香的分子鉴定的方法，包括如下步骤：

（1）木材样本的预处理；

（2）提取经（1）处理后的木材样本中的 DNA；

（3）利用引物MLCX Primer-F和MLCX Primer-R，以及探针MLCX Primer Probe对（2）中提取的DNA进行荧光PCR扩增；

（4）木材种类的确定；

所述引物和探针序列包括：

MLCX Primer-F：5'- TCCCGTTCGCTACTTTGACT -3'

MLCX Primer-R：5'- GCTATCCCGACCCTTACCA -3'

MLCX Primer Probe ：5'-VIC- TTGACATACACCCAAGC -MGB-3'。

进一步地，所述的荧光PCR扩增条件为：95℃，2min；95℃ 15s，55℃ 34s，共40个循环。