[发明专利]一种滇桂石斛组织培养繁育方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物繁殖方法，特别是一种滇桂石斛组织培养繁育方法。

背景技术

滇桂石斛(DendrobiumguangxienseS.J.ChengetC.Z.Tang)，为兰科石斛属多年生植物，国家二级保护植物。生于海拔约1200米的石灰山岩石上或树干上。产于中国广西、贵州西南和云南东南部。滇桂石斛的茎紫色而柔软，是加工紫皮枫斗的主要原料之一，具有较高的药用价值，同时滇桂石斛花唇瓣上有紫红色斑块，具有很高的观赏价值。

目前滇桂石斛已经有人工栽培，主要通过分株繁育或扦插方式繁殖，但所需时间很长，繁殖倍率低，生产上难以实现大面积栽培。虽然滇桂石斛也有种子，但种子不具胚乳，无发芽能力，只有在真菌共生下，才能促进种子萌发生长，且发芽率非常低，通过种子繁育也无法满足生产需要。

发明内容

本发明的目的是提供一种滇桂石斛组织培养繁育方法，能够有效快速地提高滇桂石斛种苗的繁殖速度和质量，实现滇桂石斛优质种苗的工厂化育苗，以满足生产上的需要。

本发明通过以下技术方案达到上述目的：一种滇桂石斛组织培养繁育方法，包括以下步骤：

(1)外植体的选择与消毒：取滇桂石斛健康植株新萌发的嫩芽作为外植体，剥去外层包叶后，依次用2％(v/v)洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1％(v/v)升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；

(2)外植体初代诱导获得无菌试管苗：将步骤(1)得到的外植体置于解剖镜下，剥去0.2-0.3mm的茎尖分生组织，接种到MS培养基中，在培养温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养60天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；

(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养：将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养75天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加2.0-3.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、2.5-4.0mg/L的萘乙酸NAA、0.1-1.0mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。

本发明的突出优点在于：

(1)采用生物技术对滇桂石斛进行组织培养快速繁殖，通过滇桂石斛丛生芽的繁殖，能够在短时间内培育出大量适合栽培种植的滇桂石斛幼苗，保障滇桂石斛种苗的增殖系数和种苗质量，实现规模化生产，满足生产上的需要。

(2)采用本发明所述的培养方法得到的滇桂石斛丛生芽增殖系数达到25-30倍，丛生芽健壮，接种到生根培养基后容易生根。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。

实施例1

本发明所述的滇桂石斛的组织培养快速繁殖方法的一个实例，包括以下步骤：

(1)外植体的选择与消毒：取滇桂石斛健康植株新萌发的嫩芽作为外植体，剥去外层包叶后，依次用2％(v/v)洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1％(v/v)升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；

(2)外植体初代诱导获得无菌试管苗：将步骤(1)得到的外植体置于解剖镜下，剥去0.2-0.3mm的茎尖分生组织，接种到MS培养基中，在培养温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养60天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；

(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养：将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养75天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、2.5mg/L的萘乙酸NAA、1.0mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，丛生芽增殖系数为24.8。

实施例2